诺贝尔医学奖RNA干扰机制专家讲座.pptxVIP

;克雷格?梅洛（CraigC.Mello）;;2.RNAi发觉;3.RNAi机理;3.2siRNA(干扰性小RNAsmallinterferingRNA，简称siRNA)形成;（1）dsRNA在细胞中大量扩增

（2）dsRNA在细胞中到达一定量时，核酸内切酶Dicer识别并与之结合形成酶-dsRNA复合体

（3）核酸内切酶Dicer对siRNA进行切割，产生21-23nt长dsRNA小片段，即siRNA;3.23siRNA特征性结构：;3.3RISC形成和发挥效应;☆Argonaute有一个月牙型底座由三部分组成，分别为N-端（amino-terminal）、中部（middle）和PIWI区域（PIWIdomain）。月牙底座上面有一个PAZ部分，由茎杆结构支撑。Argonature蛋白有一个凹槽贯通整个蛋白，凹槽内壁带正电有利于与RNA带负电磷酸骨架结合;;(1)RISC中siRNA依赖ATP水解释放能量而解旋，双链转变成单链而使复合体被激活，得到活性RISC。

(2)siRNA解旋后，siRNA单链3’端伸入PAZ裂缝中，整个单链沿着PAZ伸展开，同时目标片段mRNA结合于新月型底座。siRNA反义链与mRNA互补区域结合，形成双链

(3)在离单链siRNA5’端9个碱基处,由RNA酶切割mRNA，阻断RNA翻译，到达在RNA水平上干扰基因表示效果;紫色

正义RNA段

蓝色

反义RNA段

绿色

目标信使RNA;siRNA形成后另外作为一个特殊引物,在RNA依赖RNA聚合酶（RNA-dependentRNApolymerase，简称RdRp)作用下以靶mRNA为模板合成dsRNA,后者在Dicer酶作用下又可被降解形成新siRNA，新生成siRNA再进入上述循环;3.5siRNA目标位点筛选;;＊抗肿瘤治疗RNAi可用于抑制癌基因表示

＊传染性疾病依据病原体如病毒、细菌等致病基因序列，以及生物体内与疾病发生相关基因序列，设计和制备与这些基因序列有同源序列dsRNA，转入动植物内使相关疾病基因“缄默”，从而到达治疗效果。;;;四未解难题;ThankYou！