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;克雷格?梅洛(CraigC.Mello);;2.RNAi发觉;3.RNAi机理;3.2siRNA(干扰性小RNAsmallinterferingRNA,简称siRNA)形成;(1)dsRNA在细胞中大量扩增
(2)dsRNA在细胞中到达一定量时,核酸内切酶Dicer识别并与之结合形成酶-dsRNA复合体
(3)核酸内切酶Dicer对siRNA进行切割,产生21-23nt长dsRNA小片段,即siRNA;3.23siRNA特征性结构:;3.3RISC形成和发挥效应;☆Argonaute有一个月牙型底座由三部分组成,分别为N-端(amino-terminal)、中部(middle)和PIWI区域(PIWIdomain)。月牙底座上面有一个PAZ部分,由茎杆结构支撑。Argonature蛋白有一个凹槽贯通整个蛋白,凹槽内壁带正电有利于与RNA带负电磷酸骨架结合;;(1)RISC中siRNA依赖ATP水解释放能量而解旋,双链转变成单链而使复合体被激活,得到活性RISC。
(2)siRNA解旋后,siRNA单链3’端伸入PAZ裂缝中,整个单链沿着PAZ伸展开,同时目标片段mRNA结合于新月型底座。siRNA反义链与mRNA互补区域结合,形成双链
(3)在离单链siRNA5’端9个碱基处,由RNA酶切割mRNA,阻断RNA翻译,到达在RNA水平上干扰基因表示效果;紫色
正义RNA段
蓝色
反义RNA段
绿色
目标信使RNA;siRNA形成后另外作为一个特殊引物,在RNA依赖RNA聚合酶(RNA-dependentRNApolymerase,简称RdRp)作用下以靶mRNA为模板合成dsRNA,后者在Dicer酶作用下又可被降解形成新siRNA,新生成siRNA再进入上述循环;3.5siRNA目标位点筛选;;*抗肿瘤治疗RNAi可用于抑制癌基因表示
*传染性疾病依据病原体如病毒、细菌等致病基因序列,以及生物体内与疾病发生相关基因序列,设计和制备与这些基因序列有同源序列dsRNA,转入动植物内使相关疾病基因“缄默”,从而到达治疗效果。;;;四未解难题;ThankYou!
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