小吞噬细胞的吞噬功能检测课件.pptVIP

新乡医学院免疫学教研室

|掌握吞噬作用的原理和方法|掌握显微镜油镜的使用方法|掌握瑞氏染色的方法实验目的

|血液中的多形核白细胞是一种小吞噬细胞，其细胞浆内含有多种酶类，对侵入体内的细菌具有强大的吞噬和消化功能，是机体非特异性免疫的重要组成部分。实验原理|意义：在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超敏反应和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程，因此，测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反映机体的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指标。

吞噬|大吞噬细胞（单核巨噬细胞）|小吞噬细胞（中性粒细胞）细胞分类

|来源：单核巨噬细胞|存在部位：大吞噬细胞血液（单核细胞)全身结缔组织及小血管的基底膜组织（巨噬细胞）|功能基础：富含溶酶体及线粒体|功能：吞噬病原微生物（寄生虫|反应时间及寿命：反应时间长（48h），寿命长。

|来源：中性粒细胞小吞噬细胞|存在部位：血液、炎症部位（全身）|功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。功能：主要吞噬化脓菌||反应时间及寿命：反应时间快,数分钟到几小时，寿命短.平均数小时

吞噬示意图

吞噬过程

|无菌肉汤|白葡菌液|注射器实验材料|瑞氏染液|PBS缓冲液|

|1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹腔注射无菌肉汤2ml，诱导浆液渗出实验方法|2.注射：给小白鼠腹腔内注射白葡菌液1ml，让小鼠活动|3.取样：注射后35分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂片|4.染色：标本干燥后瑞氏染液染色

|5.瑞氏染色：滴加3~4滴瑞氏染液于标本上，以完全盖住标本为宜。瑞氏染色|30秒后滴两倍体积的缓冲液，吹吸均匀。|3分钟后甩去玻片上的染液，吸水纸吸干。|油镜镜检

|油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡兰色，核分叶、紫红深染，白葡菌呈兰色。可见中性粒细胞胞浆内吞噬有很多白葡菌。实验结果

注意事项|注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀|注意掌握好染色时间

大吞噬示教片§巨噬细胞吞噬鸡红细胞

油|油镜头上常刻有白色环圈，或标镜有“油”字、“oil”、100/1.30等。使用油镜可放大1000倍头的识别|

|使用油镜观察时，需加香柏油，因为油镜需要进入镜头的光线多，但油镜的透光孔最小，这样进入的光线就少，物体不易看清楚。同时又因自玻片透过的光线，由于介质（玻片－空气－接物镜）密度（玻片：原理n=1.52，空气：n=1.0）不同而发生了折射散光，因此射入镜头的光线就更少，物体更看不清楚。

|采用一种和玻片折光率相接近的介质如香柏油，加于标本与玻片之间，使光线不通过空气，这样射入镜头的光线就较多，物象就可看得清楚。原理

原理

|先用低倍镜找到视野|a．将光线调至最强程度（聚光器提高，光圈全部开放）。|b．转动粗调节器使载物台下降，滴香柏油1小滴（不要过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。使用方法|c．转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。|d．俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。|e．慢慢转动粗调节器，使载物台徐徐下降至见到标本的物象为止。|f．转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。|g．左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。||最后用擦镜液将油镜头上的香柏油擦干净

下周实验课内容|豚鼠的过敏实验（发敏）