蔬菜产地土壤和产品中抗性因子的健康风险评价技术规范.pdfVIP

蔬菜产地土壤和产品中抗性因子的健康风险评价技术规范.pdf

  1. 1、本文档共5页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  5. 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  6. 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  7. 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  8. 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多

蔬菜产地土壤和产品中抗性因子的健康

风险评价技术规范

1范围

本文件规定了蔬菜产地土壤和产品中抗性因子的健康风险评价的术语和定义、设备和材料、试验程

序、样品采集和制备、测定分析及判定规则。

本文件适用于蔬菜产地土壤和产品中抗性因子对人类健康危害风险的定性分级评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,

仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本

文件。

GB4789.1-2016食品微生物学检验总则

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

HJ/T166-2004土壤环境监测技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

抗性因子

又称耐药性决定因子或抗生素耐药基因(ARG),指微生物编码的可以对抗菌药物产生耐药性或敏

感性下降的基因。

健康风险

是指抗性基因通过土壤传递给蔬菜产品,进而可能对人类健康造成风险。

移动元件

是指携带抗性因子的可移动遗传元件,包括整合子、转座子、质粒、基因岛等。

ESKAPE病原菌

包括屎肠球菌(E)、金黄色葡萄球菌(S)、肺炎克雷伯菌(K)、鲍曼不动杆菌(A)、铜绿假单胞菌(P)

和肠杆菌科细菌(E)。

4设备和工具、材料

设备

——均质仪;

——Nanodrop核酸浓度测定仪;

——微量移液器:0.1μL~2.5μL、1μL~10μL、10μL~100μL、100μL~1000μL;

——电子天平:感量0.001g;

——水浴锅;

——生物信息学服务器。

工具和材料

1

——铁铲、圆形取土钻;

——无菌采集袋;

——剪刀;

——商品化土壤DNA提取试剂盒。

5试验程序

蔬菜产地土壤和产品中抗性因子人类健康风险分级试验流程如图1所示。

图1蔬菜土壤抗性因子人类健康风险分级试验流程

6样品采集和制备

样品采集

6.1.1土壤

为了保证样品的代表性和随机性,每个土壤单元设3个~7个采样区,单个采样区是自然分割的一个

田块,每个采样区的样品为蔬菜土壤的混合样,参照HJ/T166-2004,可采用对角线法、梅花点法、棋

盘式法、蛇形法设计样品点,采集土壤的深度为10cm左右,每个点采集土壤1g,混合均匀后作为1个样

本,放入无菌采样袋中,标记信息,密封后-20℃冷藏。

6.1.2蔬菜

采集不同类型蔬菜的对应食用部分(果实或茎叶等),每种类型的蔬菜采集10g,将其放入无菌袋

中,标记信息,密封后-20℃冷藏。

样品运输

采集的样品按GB4789.1要求运达检验单位,运输时间不超过24h,运输工具应保持清洁,运输过程

中应防止包装破损导致样品渗漏。

样品制备和保存

样品运回实验室时,应确认样品完好情况。

对于土壤样本,不用进行预处理可直接提取总DNA。对于蔬菜样本,需要进行样本预处理。用已灭

菌的Milli-Q水清洗蔬菜,直至眼观达到家常做菜洗菜的清洁程度,加入500mL0.85%无菌生理盐水,

置于摇床震荡15min。震荡产生的洗液过0.45μm滤膜收集菌体,用真空泵抽干后置于-80℃以备总DNA

的提取。

7测定分析

2

样本总DNA提取及测序

使用商品化土壤总DNA提取试剂盒提取土壤和预处理后蔬菜样本的总DNA,使用nanodrop仪测定所提

取总DNA的浓度和纯度,经测定需要满足总DNA含量2μg,同时OD260/OD280介于1.6~2.0之间。将检测

合格的DNA样本送至测序公司进行二代宏基因组测序,每个样品测序的数据量为10G。

宏基因组数据拼接、注释和分析

使用本地生物信息学分析平台或委托生物技术公司开展宏基因组数据的拼接、注释和分析。

原始数据质控:根据Index序列区分各个样品的数据,提取出的数据以fastq格式保存,获得原始

数据raw

文档评论(0)

ulttle + 关注
实名认证
文档贡献者

资料大多来源网络,仅供交流与学习参考, 如有侵犯版权,请私信删除!

1亿VIP精品文档

相关文档