慢病毒安全培训.pptxVIP

;纲要;一、慢病毒是什么--慢病毒的结构;慢病毒的载体改进;《病原微生物实验室生物安全管理条例》中规定HIV活病毒为第二类病原微生物，培养、分离要在BSL-3中操作的；抗体、血清检测在BSL-2级别实验室进行；

《慢病毒生物安全手册》中规定所有与慢病毒载体有关的工作必须在BSL2实验室进行。这包括但不限于一间具有负压和门封闭的特点用于组织培养的房间，并配备认证的二级生物安全柜(BSC)和专用的细菌培养箱。

HIV病毒通常通过体液接触传播

;病毒;人员

设备

操作

废弃物管理

样品接收

危险事故应急等

;WHO各级生物安全实验室的个体防护要求;;眼睛防护装备

安全眼镜和护目镜

防飞溅，撞击，腐蚀性液体，强酸碱等

安全眼镜、护目镜或面罩使用后未经去除污染，不得带离实验区

洗眼装置

感染性物质或腐蚀性物质溅至眼睛，就近的洗眼装置用大量清水冲洗眼睛表面至少15-30分钟。

注意：速度是决定性的。

;头面部防护装备

口罩

口罩可以保护部分面部免受有毒有害物质等喷溅物的污染。

;手部防护装备

手套的选择

乳胶手套,耐热，耐冷，不锈钢网

手套的检查

是否褪色、穿孔或有裂缝。

手套的使用

双层，覆盖袖口，消毒后脱弃

避免手套的“触摸污染”

身体，物品

脱手套过程

;用过的个人防护用品的处理

凡在生物安全实验室使用过的个人防护装备均应视为被污染过。一次性用品可高压灭菌后作为废物统一处理。

可重复使用的防护服帽子等高压灭菌后再洗涤处理，重复使用。

其它根据物品性质选择物理或化学方法处理。;安全操作

操作原则：要求所有的技术操作尽量规范，操作病毒时要特别小心，谨慎，避免发生危险。

1、位置：关于慢病毒一切操作都要在Ⅱ级安全柜内进行。

2、细胞培养：细胞培养或传代过程中，动作要轻柔，以免损伤细胞。

3、细胞观察：使用显微镜观察细胞时，拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。

4、移液：用移液枪吸液体时，枪头要带滤芯且动作要轻柔，避免液体倒吸移液枪内，造成污染以及损坏仪器。

5、包装和感染：包装和感染病毒的细胞一律只能放在单???的培养箱中培养，防止污染其他细胞

6、在生物安全柜以外的接触到任何事物比如冰箱、离心机或细菌培养器，先去掉可能污染的手套，换上新的手套。

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7、存放：要保存的病毒存放前管子需用封口膜严密封口，做好标记；临时放置于4度冰箱的病毒请在管子外面再单独套上较厚的塑料袋并做好标记。

8、消毒：每次实验操作时均需用70%酒精处理工作台面和双手，试验完毕后同样用70%酒精处理。

9、只要有可能，应该尽量避免使用利器；

10、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。

11、污染的液体或使用过的器皿在实验完成后要及时处理。

12、超净台和显微镜用完随手关闭电源，盖上水浴锅盖子并关上电源。

13、病毒实验完成请务必用洗手液彻底洗手。

14、出现溢出事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告，并制订关于如何处理溢出物的书面操作程序便于后人遇到类似事情快速处理。

;生物安全柜:

在工作开始时，不锈钢工作表面可以用70%的酒精擦拭。

当带双手套时，在从生物安全柜中移出双手之前，消毒，取下外层的手套并将其存放在一个固体废物袋中。

在工作结束时，必须消毒所有从生物安全柜中拿出的物品。生物安全柜的表面必须用70%的酒精擦拭和降低视窗。

安全柜内壁和空间均喷洒大量70%酒精，擦拭。擦拭用纸也一起投入灭菌袋，实验完毕立即系紧袋口拿出病毒间，连同口罩、帽子、病毒衣等一起进行高压灭菌。

使用过的移液枪喷洒大量70%酒精处理后置于安全柜中紫外灭菌，安全柜紫外灭菌30分钟后方可继续使用。

;离心分离：

需要离心时，应使用密封性好的离心管，或者用封口膜封口后离心。

确保管子适当平衡；

离心分离后，离心机盖子必须小心打开；

危险性样品在生物安全柜中打开；

从生物安全柜中移出转头之前应该用70%的酒精进行喷洒整个转头。

安全罩时，必须装上安全罩，防止气溶胶，关闭。生物安全柜移走之前用75%的酒精擦拭

在结束时，必须消毒离心机转子和/或桶。;处理一般流程;固体废弃物:

包括废弃枪头、EP管，细胞培养皿，玻璃器皿等，放入预先装有10%新洁尔灭液体的塑料盒或容器中浸泡。消毒液需新鲜配制。

在工作结束时，使用70%的酒精进行喷洒并将浸泡过的物品放入生物危险废物袋中。

高压灭菌后再洗涤或丢弃处理。

处理频次：每次实验完成后

;液体废弃物：通常被吸入一个真空瓶中，其中真空瓶内包含1/10容量的浓缩漂白剂；没有吸入的液体垃圾必须用漂白剂处理使其最终浓度达到至少10%并且放置最少30分钟来灭活病毒。去污染后再排放。

;四、实验室安全事故处理;