DNA的粗提取-完整PPT课件.ppt

第5节DNA的粗提取与鉴定染色体成分蛋白质RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。一、实验原理1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水而破裂，释放出内容物。2.洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。3.DNA在物质的量浓度为0.14mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。4.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。5.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色。二、实验设计1、实验材料的选取选取原则DNA含量丰富材料易得提取简便鸡血细胞鸡血细胞核DNA含量丰富材料易得鸡血细胞极易吸水胀破若是动物细胞，如何获取DNA滤液？为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？在低浓度的溶液中红细胞会吸水胀破。2、破碎细胞，获取含DNA的滤液若是植物细胞，如何获取DNA滤液？加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解。2、破碎细胞，获取含DNA的滤液滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。3、去除滤液中的杂质滤液+同体积冷却95%酒精白色丝状物析出：溶解：鉴定：沸水5minDNA＋二苯胺蓝色物4、DNA的析出与鉴定将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中5.实验材料

①动物

鸡血细胞液的优点提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。

鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取②植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。

三、方法与过程制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液血浆血细胞方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞液2.提取细胞核物质3.溶解核内的DNA4.析出含DNA的粘稠物5.滤出含DNA的粘稠物柠檬酸钠溶液20m1蒸馏水2mo1/L的NaCl溶液加蒸馏水防止血凝固加速血细胞破裂溶解DNANaCl溶液稀释至0.14mol/L使DNA最大限度地释出使含DNA的黏稠物被留在纱布上方法步骤加入物质目的6.DNA的黏稠物再溶解7.过滤含DNA的NaCl溶液8.提取杂质较少的DNA9.DNA的鉴定2mo1/L的NaCI溶液冷却的95％的酒精二苯胺试剂使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含DNA的滤液中的杂质提取DNA有DNA则出现蓝色鉴定不变蓝——对照组溶液逐渐变蓝丝状物(DNA)实验组图示结果加入物质比较均加入：①4mL二苯胺试剂②2mol/LNaCl溶液5mL鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。自变量你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？取少许丝状物，置玻片中央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。注意事项

①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。

②整个实验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”

两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。

酒精最好用95%的冷酒精;

③加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。

④鉴定DNA时需沸水浴加热。

⑤二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位.

⑥盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）

DNA的直径约为20×10-10m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？答：DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA聚在一起形成的。**