3.2.1 基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

103三、“分子运输车”----基因进入细胞的载体（1）质粒：①②将外源基因送入受体细胞,在受体细胞内对目的基因进行大量复制.1.作用：（2）其他：动植物病毒、噬菌体2.种类：①化学本质：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。

203“分子运输车”----基因进入细胞的载体大肠杆菌及质粒结构模式图②运载体需具备的条件及原因（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存（2）有一个至多个限制酶切点（3）有某些标记基因（4）对受体细胞无害、易分离能进入受体细胞并在受体细胞内复制并表达；便于与不同目的基因结合便于鉴定和筛选真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。

3质粒人的DNA分子用EcoRⅠ限制酶切割用EcoRⅠ限制酶切割用DNA连接酶粘合计划让大肠杆菌表达人类生长激素？

4在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是______________进行过_______的，这些质粒上常有____________，如____________、_____________等，便于__________________；天然质粒的基础上人工改造特殊的标记基因四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因重组DNA分子的筛选③载体上标记基因的基本原理

1.2基因工程的基本操作程序

培育转基因抗虫棉的简要过程与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉

（有抗虫特性）导入抗虫基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定

(1)概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。(2)实例：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。1、目的基因资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因那么，如何筛选目的基因呢？一、目的基因的筛选和获取

筛选方法从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选已知结构科学家掌握了Bt基因的序列信息功能清晰Bt抗虫蛋白只在某类昆虫肠道的碱性环境中才表现出毒性，对人和牲畜无影响2、目的基因的筛选一、目的基因的筛选和获取

2、目的基因的筛选测序技术测定核酸和蛋白质序列序列数据库以碱基顺序或氨基酸残基顺序为基本内容的分子生物信息数据库序列比对工具把感兴趣的序列跟已经存在的序列数据库进行比较的工具。通过比对识别相关的序列，从而能获得目的基因和蛋白质的功能利用测序技术、序列数据库（如GenBank）、序列对比工具（如BLAST）等，找到合适的目的基因一、目的基因的筛选和获取

3、目的基因的获取（2）从基因文库中获取（1）利用PCR技术扩增（3）人工合成一、目的基因的筛选和获取

DNA片段基因1基因2基因3放大终止子非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子原核基因知识补充基因的结构编码区：编码蛋白质的合成非编码区：不能编码蛋白质，调控遗传信息的表达转录RNA聚合酶识别和结合位点结束转录mRNA蛋白质翻译

基因工程用获取的目的基因，有的含有启动子和终止子，有的不含有。此外，生物体正常的DNA上一般还会有一个特殊部位，称为复制原点，只有含有复制原点的DNA才可以进行DNA的复制。资料游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，且游离的DNA片段不能稳定遗传和表达。

确保基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。1、目的---基因工程的核心思考：要使Bt基因在受体细胞中稳定存在，并能够表达和发挥作用，载体还需要哪些结构？2、基因表达载体的组成思考：要各个元件有什么作用？二、基因表达载体的构建

目的基因：能控制表达所需要的特殊性状启动子：位置：基因的上游功能：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。复制原点：DNA复制的起始位点终止子：位置：基因的下游功能：终止转录标记基因：便于重组DNA分子的筛选和鉴定。二、基因表达载体的构建

项目启动子终止子起始密码子终止密码子本质_________________________位置目的基因上游目的基因下游mRNA首端mRNA尾端功能_________________________________________________________________________________________________________________________DN