SNT 1816-2013 转基因成分检测 番茄检测方法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1816—2013

代替SN/T1816—2006

转基因成分检测番茄检测方法

Detectionofgeneticallymodifiedcomponents—Tomatotestmethods

2013-03-01发布2013-09-16实施

中华人

中华人民共和国

I

SN/T1816—2013

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准代替SN/T1816—2006《番茄中转基因成分定性PCR检测方法》。本标准与SN/T1816—2006相比，主要技术变化如下：

——规范了专业用语和表述方式；——修订了原标准的结构；

——术语和缩略语参照GB/T19495.1《转基因产品检测通用要求和定义》中的规定；——在常规PCR检测方法中增加了被检基因的启动子FMV35S;

——增加了实时荧光PCR检测方法及其结果判定方法。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张祥林、王肿、陈颖、张江国、张伟。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——-SN/T1816—2006。

1

SN/T1816—2013

转基因成分检测番茄检测方法

1范围

本标准规定了番茄及其制品中转基因成分常规PCR和实时荧光PCR检测方法。本标准适用于对转基因番茄及其制品中转基因成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法

SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法

3术语、定义和缩略语

GB/T19495.1界定的术语、定义和缩略语适用于本文件

4防污染措施

检测过程中防止交叉污染的措施应符合GB/Ti9405.2中的规定

5原理

样品经过提取DNA后，针对转基因番茄内、外源基因的基因序列设计引物和探针，通过常规PCR或实时荧光PCR,检测其中是否含有各种内、外源基因，达到对番茄及其制品中有无转基因成分的

判定。

6仪器和用具

6.1仪器

实时荧光PCR仪、基因扩增仪、电泳仪、电泳槽、超净工作台、电子天平(感量1mg)、凝胶成像仪、全温水浴、高速冷冻离心机、高压灭菌锅、制冰机、涡旋振荡器、纯水仪、低温冰箱、核酸蛋白分析仪、微型离心机、微波炉。

6.2用具

微量可调移液器及配套枪头(0.1μL～2μL,2.5μL～10μL,2μL～20μL,10μL～100μL,

2

SN/T1816—2013

50μL～200μL,100μL～1000μL)、PCR反应管、离心管(1.5mL和2mL)、研钵。

6.3试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。

6.3.1样品提取试剂

无水乙醇，异丙醇，三氯甲烷，异戊醇，乙酸钠，蛋白酶K,TE缓冲液：Tris1.21g/L、Na?-EDTA0.372g/L,pH8.0;CTAB裂解液：CTAB20g/L、氯化钠81.9g/L,Tris12.1g/L、Na?-EDTA7.5g/L,pH8.0,高压灭菌，使用前加入终浓度为2%的β巯基乙醇；RNaseA:2mg/L。

6.3.2PCR反应试剂

10×PCR缓冲液(氯化钾100mmol/L、硫酸铵160mmol/L、硫酸镁20mmol/L、Tris-HCl200mmol/L、1%TritonX-100、BSA1mg/mL),MgCl?(2.5mmol/L),dNTP溶液(dATP、d