SC∕T 7227-2017 传染性造血器官坏死病毒转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.docxVIP

SC∕T 7227-2017 传染性造血器官坏死病毒转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.docx

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ICS65.020.30B41

F

中华人民共和国水产行业标准

SC/T7227-2017

传染性造血器官坏死病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法

Detectionmethodofreversetranscriptationloop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)forinfectioushaematopoieticnecrosisvirus

布发22-21-71022018-06-01实施

中华人民共和国农业部发布

I

SC/T7227—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由农业部渔业渔政管理局提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。

本标准起草单位:全国水产技术推广总站、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人:贾鹏、郑晓聪、余卫忠、王津津、李清、刘莹、温智清、何俊强、于力、兰文升、史秀杰、刘药、秦智锋。

1

SC/T7227—2017

传染性造血器官坏死病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法

1范围

本标准规定了传染性造血器官坏死病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的试剂和材料、器材和设备、操作步骤、结果判定和防污染措施。

本标准适用于传染性造血器官坏死病毒的初检

2规范性引用文件PUB

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用女件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,具最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T15805.2传染性造血器官坏死病诊断规程GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范OIE《水生动物疾病诊断手册》(2016版)

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。工

AMV逆转录酶。禽类成髓细胞瘤病毒逆转录酶(avianmyelobastosisvirusreyersetranscriptase)

Bst酶:BsDNA聚合酶(大片段)[BstDNApolymerase(largelragment)DEPC:焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate)

dNTPs:脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)EDTA:乙二胺四乙酸(ethlenediaminetetracetieacid)

IHNV:传染性造血器官坏死病毒infectioushaematopoieticnecrosisvirusPBS:磷酸盐缓冲溶液(phosphatebuffersaline

RT-LAMP:逆转录环介导等温扩增(reversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplifica-

tion)

RNA:核糖核酸(ribonucleicacid)

4概述

在IHNV基因组5401bp~5701bp区域设计6条特异引物(参见附录A),在Bst酶的作用下,65℃恒温扩增30min~60min,即可实现IHNV核酸扩增。反应结束后,加入荧光显色液即可通过颜色变化判定结果。

5试剂和材料

5.1水:符合GB/T6682中一级水的规格。

5.2IHNV参考株:由农业部指定单位提供。

2

SC/T7227—2017

5.375%乙醇:用新开启的无水乙醇(分析纯)和DEPC水(见附录B中的B.1)配制,-20℃预冷。

5.4Trizol试剂,4℃保存。

5.5异丙醇:分析纯试剂,使用前预冷至-20℃。

5.6三氯甲烷:分析纯试剂,常温保存。

5.7dNTPs:含dCTP、dGTP、dATP、dTTP。

5.8Bs

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