SNT 4419.17-2016 出口食品常见过敏原LAMP系统检测方法 第17部分：荞麦.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T4419.17—2016

出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第17部分：荞麦

FoodallergendetectionwithLAMPmethodsforexport—Part17:Buckwheat

2016-03-09发布2016-10-01实施

中

中华人民共和国

发布

I

SN/T4419.17—2016

前言

SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成：——第1部分：开心果；

——第2部分：腰果；

——第3部分：胡桃；

——第4部分：榛果；

——第5部分：杏仁；

——第6部分：扁桃仁；

——第7部分：巴西坚果；——第8部分：澳洲坚果；——第9部分：栗子；

——第10部分：大豆；

——第11部分：羽扇豆；——第12部分：花生；

——第13部分：葵花籽；——第14部分：芝麻；

——第15部分：大麦；

——第16部分：小麦；

——第17部分：荞麦；

——第18部分：芥末；

——第19部分：胡萝卜；——第20部分：芹菜；

——第21部分：牛奶；——第22部分：虾。

本部分为SN/T4419的第17部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：龚方、高宏伟、孙敏、张舒亚、刘彩霞、陈颖、韩建勋、黄文胜、吴亚君、邓婷婷。

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SN/T4419.17—2016

出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第17部分：荞麦

1范围

SN/T4419的本部分规定了出口食品中过敏原荞麦成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。

本部分适用于食品及其原料中过敏原养麦成分的定性检测。

本部分所规定方法的最低检测限(LOD)为0.5%(质量分数)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

SN/T1961.18—2013出口食品过敏原成分检测第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分

3术语、定义和缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

过敏原allergen

又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原

3.1.2

荞麦buckwheat

学名：Fagopyrumesculentum,别名净肠草，蓼科荞麦属植物，粮食作物，其中甜荞(F.esculentum)

和苦荞(F.tataricum)是两种主要的栽培种。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)

LAMP:环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification)

TritonX-100:聚乙二醇辛基苯基醚

4防污染措施

环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403—2008中附录D的规定。

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SN/T4419.17—2016

5方法提要

样品经研磨后，提取DNA,以DNA为模板，采用荞麦过敏原蛋白基因特异性检测引物进行LAMP扩增，通过颜色变化观察判定是否存在荞麦成分。

6LAMP检测方法

6.1原理

根据荞麦过敏原蛋白基因序列设计内引物、外引物各一对，特异性识别靶序列上的6个独立区域。在链置换型DNA聚合酶的作用下，内引物与模板DNA退火、延伸，并利用外引物与模板DNA的退火、延伸，并利用外引物与模板DNA的退火延伸置换出内引物合成链。由于内引物与相邻区域存在互补区，游离的内引物合成链折叠成茎-环结构，以自身为模板，启动链置换扩增循环，合成长度不一的大量茎-环结构DNA。加入显色液，即可通过反应液的颜色变化观察判定结果。DNA聚合反应析出的焦磷酸根离子与溶液中的Mg2+结合，形成焦磷酸镁乳白色沉淀，故也可通过反应液的浊度变化观察判定