SNT 1569.2-2013 出口河豚鱼中河豚毒素检测方法 第2部分：小鼠生物法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1569.2—2013

出口河豚鱼中河豚毒素检测方法第2部分：小鼠生物法

Determinationoftetrodotoxininpufferfishforexport—Part2:Methodofmousebioassay

2013-03-01发布2013-09-16实施

国家质量监督检验检疫总局中华人民共和国发布

国家质量监督检验检疫总局

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SN/T1569.2—2013

前言

SN/T1569《出口河豚鱼中河豚毒素检测方法》分为两个部分：

——第1部分：ELISA法；——第2部分：小鼠生物法。

本部分为SN/T1569的第2部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：王静、杨丽君、刘和平、李兆杰、胡巧茹、丛伟红、时文春、甄理、刘玉敏。

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SN/T1569.2—2013

出口河豚鱼中河豚毒素检测方法第2部分：小鼠生物法

1范围

SN/T1569的本部分规定了出口河豚鱼中河豚毒素的小鼠生物检测方法。本部分适用于出口河豚鱼中肌肉组织、肝脏、皮肤中河豚毒素的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB14925实验动物环境及设施

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

河豚毒素tetrodotoxin;TTX

豚毒鱼类及其他生物体内含有的一种剧毒的生物碱，又称蝶螈毒素、东方鲀毒素等，分子式为C?H??O?N?,相对分子质量319,是一种通过阻断钠离子通道抑制神经冲动的非蛋白类神经毒素。

3.2

毒力toxicity

药剂对特定生物发生直接作用的性质和程度。

3.3

鼠单位mouseunit;MU

对体重为20g的无特定病原体级(SPF)昆明系雄性小鼠腹腔注射1mL河豚毒素提取液，使其在

30min内死亡所需的最小毒素量。

3.4

中间致死时间mediandeathtime

将小鼠死亡时间按变量值大小次序排列，居于中间位置的那个数值就是中间致死时间。

4样品保存

送检样品如不能立即检验，应分别用标签注明来源、取样日期、品种及编号，装塑料袋密封。抽样后样品应立即置于-18℃以下冷冻保存。

5测定方法

5.1方法提要

根据河豚毒素易溶于酸性溶液的原理，试样制备后经2次0.5%乙酸溶液煮沸提取，20000g离心

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收集上清液，将2次上清液合并并定容至25mL,用于小鼠生物试验，根据小鼠注射提取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重校正鼠单位，计算确定河豚毒素含量。

5.2试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中三级水的要求。

5.2.10.5%乙酸溶液：将5mL乙酸(C?H?O?)用水稀释至1L。

5.2.2小白鼠：28日龄，体重19g～21g的无特定病原体级(SPF)昆明系雄性健康小鼠。

5.3仪器和设备

5.3.1均质器。

5.3.2电子天平：感量0.1g。

5.3.3离心机：离心力≥20000g。

5.3.4秒表。

5.3.5玻璃器皿：烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等。

5.3.6一次性注射器：1mL。

5.3.7电炉。

5.3.8剪刀。

5.3.9镊子。

5.3.10手术刀。

5.3.11微量移液器：1mL。

5.4测定步骤

5.4.1样品中毒素的提取

5.4.1.1冷冻样品装于密封塑料袋内于流水下急速解冻，蒸馏水洗净后用滤纸吸干，分解成肌肉组织、肝脏、皮肤等部分，分别称量后将各组织剪碎，充分均质。

5.4.1.2对于肌肉组织，准确称取样品10.0g/于50mL离心管中，加入0.5%乙酸溶液11mL,充分混匀，沸水浴中煮沸10min,不断搅拌以防止组织结块。

5.4.1.3冷却至室温，200