生物化学实验市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptxVIP

生物化学实验;;四、试验室规则;五、试验汇报书写;试验一分光光度法;一、实验目：;单色光与复色光;γ射线;二、分光光度法概念;;特点;三、分光光度法基本原理;1.物质对光选择性吸收;当依次将各种波长单色光经过某一有色溶液,测量每一波长下有色溶液对该波长光吸收程度(吸光度A)，然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条曲线，称为该溶液吸收光谱。;可见、紫外吸收光谱示意图;

物质对不一样色光能有选择性吸收,即一定物质主要吸收一定波长光(互补吸收)，是因为物质本身分子、原子都处于一定能级运动状态，当物质吸收了光辐射能以后，会产生能级跃迁，产生吸收光谱。;2.光吸收基本定律;透光度T(%)与吸光度A;;透光度与吸光度相互关系

溶液透光度与吸光度呈负相关。

;1.Lamber定律—吸光度与液层厚度关系

1760年，Lamber指出，当单色光经过浓度一定、均匀吸收溶液时，该溶液对光吸收程度与液层厚度L成正比。

;吸光度与光程（厚度：L）关系A=KLc;

2.Beer定律—吸光度与溶液中吸光物质浓度关系关系

1852年，Beer指出，当单色光经过液层厚度一定、均匀吸收溶液时，该溶液对光吸收程度与溶液中吸光物质浓度C成正比。

;吸光度与浓度关系A=KLc;

3.Lamber-Beer定律

将前面两条定律结合起来，就得到以下结果：

A＝KCL

K:吸光系数，为单位浓度、单位厚度时吸光度。

C:吸光物质浓度。单位mol/L

L:光经过液层厚度。单位cm

;

A=klcA—吸光度(absorbance)

L—介质厚度(length/cm)

c—浓度(concentration)

K—吸光系数(absorptivity)

;四、分光光度计基本结构;分光光度计基本结构

;722型分光光度计结构方框图;;

光源必须含有稳定足够强度连续光谱。

可见光分光光度计光源通常为白灼钨灯，其光谱范围为320nm---2500nm。

紫外分光光度计光源是低压氢弧灯，其光谱范围为150nm---400nm。;

单色器是将复杂白光分散成单色光装置，其过程为光色散。色散后单色光经反射、聚光，经过狭缝抵达溶液。

惯用单色器是棱镜或光栅。;

也叫比色皿,比色杯，用来盛被测试溶液。可见光区使用玻璃制比色皿，紫外光区使用石英制比色皿。因为玻璃会吸收紫外线。

吸收池种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为惯用。;即光电转换元件，为光电管或光电倍增管，可将透过比色皿光信号变成可测量电信号。;5.显示仪表或统计仪;五、定量分析方法;几点注意：

理想标准曲线应为：用不一样浓度标准溶液所测得吸光度对浓度作图时，是一条斜率靠近于1经过原点直线；

标准溶液浓度范围应在被测物质浓度二分之一到二倍之间；

吸光度在0.05---1.0之间为宜。

;㈡对比法

将标准与样品分别在相同条件下显色，测定其吸光度。因是相同物质在相同条件下测定，故可按下式计算出样品浓度：;六．显色反应条件选择;这些显色反应，必须满足以下条件：;3．反应生成产物有足够稳定性，以确保测量过程中溶液吸光度不变；

4．反应生成物组成恒定。

;七、试验步骤：;