酶与细胞的固定化技术.ppt

②包埋法包埋法一般适用于悬浮细胞凝胶包埋法：利用多孔凝胶为载体将动物细胞包埋固定化。琼脂糖凝胶、海藻酸钙凝胶和血纤维蛋白等半透膜包埋法：利用高分子聚合物形成的半透膜将动物细胞包裹，形成微囊型固定化细胞。第62页,共70页，星期六，2024年，5月（2）固定化动物细胞的特点可以减轻或免受剪切力的影响,提高动物细胞的存活率,反复使用或连续使用较长时间.控制发酵条件.利于产物分离.第63页,共70页，星期六，2024年，5月四、细胞器的固定化叶绿体细胞器的固定化方法聚丙烯酰胺凝胶法聚乙烯醇蛋白质截留法海藻多糖截留法第64页,共70页，星期六，2024年，5月第三节固定化酶（细胞）的评价指标一、固定化酶（细胞）的活力固定化酶（细胞）的活力：固定化酶（细胞）在特定条件下，催化某一特定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下其所催化的某一反应的反应速度来表示。单位：每（克/毫克）干固定化酶所具有的酶活力单位。或：单位面积（cm2）的酶活力单位表示（酶膜、酶管、酶板）。第65页,共70页，星期六，2024年，5月固定化酶的活力测定方法1.振荡测定法(间歇测定法)：固定化酶均匀悬浮，反应速度与反应容器的形状大小及反应液量有关。2.连续测定法固定化酶装柱，底物以不同的流速流过底物，测定流出物。利用连续分光光度法等测定方法可以对固定化酶反应液进行连续测定，从而测定固定化酶的酶活力。第66页,共70页，星期六，2024年，5月二、偶联率及酶活力回收率的测定第67页,共70页，星期六，2024年，5月三、相对酶活力的测定相对酶活力是指具有相同酶量的固定化酶活力与游离酶活力的比值。第68页,共70页，星期六，2024年，5月四、固定化酶（细胞）的半衰期固定化酶（细胞）的半衰期是指在连续测定条件下，固定化酶（细胞）的活力下降为最初活力一半时所经历的连续工作时间，以1/2表示。第69页,共70页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第70页,共70页，星期六，2024年，5月将酶细胞在一定温度下加热处理一段时间，使酶固定在菌体内，而制备得到固定化菌体。只适用于那些热稳定性较好的酶的固定化，热处理也可与交联法或其他固定化法联合使用，进行双重固定化。5、热处理法第30页,共70页，星期六，2024年，5月各种固定方法的特点比较第31页,共70页，星期六，2024年，5月复合载体PEI-SIO2的制备首先对硅胶进行活化处理：取5g硅胶至于30ml甲烷磺酸水溶液控制温度在102℃，搅拌活化4h，洗涤，抽滤后真空干燥24h即可；然后使硅胶发生氯丙基化，将活化后的硅胶以二甲苯为溶剂，加入少量的水，与γ-氯丙基三甲氧基硅烷在80℃反应6h，抽滤后的产物在索氏抽屉器中用甲苯抽屉24h，以除去γ-氯丙基三甲氧基硅烷，分离后产物经真空干燥，所制产物为氯丙基化的硅胶（CP-SIO2）；第32页,共70页，星期六，2024年，5月最后，准确称量1g氯丙基化的硅胶，至于一定浓度的聚乙烯亚胺水溶液中，于一定的温度下反应一段时间，用大量蒸馏水冲洗产物，抽滤，真空干燥后制得PEI-SIO2复合载体。第33页,共70页，星期六，2024年，5月第34页,共70页，星期六，2024年，5月第35页,共70页，星期六，2024年，5月称取0.5g经干燥的复合载体PEI-SIO2，加入适量的戊二醛溶液，搅拌并在室温条件下反应1h，产物用蒸馏水冲洗后抽滤，再加入30ml经磷酸盐缓冲溶液稀释过的脂肪酶液，在恒温水浴振荡器中于给出的温度下震荡一定的时间，即可制的固定化的脂肪酶。第36页,共70页，星期六，2024年，5月Table1IndependentvariablesandtheirlevelsforcentralcompositedesignIndependentvariablescodesVariablelevels-10+1MethanolmolarratioX1246Enzymeamount(%)X2369HexaneweightratioX30.30.60.9Temperature(℃)X4304050第37页,共70页，星期六，2024年，5月IndependentvariablescodesVariablelevels-2-10+1+2Enzymeamount(%)X112345Addedwater(v/v)X2246810Methanolmolarra