饲料中异噻唑啉酮类药物的测定 液相色谱-串联质谱法.pdfVIP

饲料中异噻唑啉酮类化合物的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件描述了饲料中异噻唑啉酮类化合物的液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料及混合型饲料添加剂中甲基异

噻唑啉酮（MIT）、甲基氯异噻唑啉酮（CIT）、噻霉酮（BIT）的测定。

本文件甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、噻霉酮的检出限均为10µg/kg，定量限均为30µg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的异噻唑啉酮类化合物用乙腈提取，经通过式亲水亲脂平衡固相萃取柱净化，用液相色谱-

串联质谱仪检测，外标法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1水：GB/T6682，一级。

5.2甲醇：色谱纯。

5.3标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取标准品甲基异噻唑啉酮（CAS号：2682-20-4，纯度不低于

99%）、甲基氯异噻唑啉酮（CAS号：26172-55-4，纯度不低于99%）、噻霉酮（CAS号：2634-33-5，

纯度不低于99%）适量，，分别用甲醇（5.2）溶解、定容、混匀，配制成1mg/mL的标准储备溶液，

或购买市售有证标准溶液。于－18℃以下保存，有效期为6个月。

5.4混合标准中间溶液（10μg/mL）：分别准确移取标准储备溶液（5.3）各100μL于10mL棕色容

量瓶中，用甲醇（5.2）稀释、定容，混匀。于2℃~8℃保存，有效期为3个月。

5.5混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.4）于棕色容量瓶中，分别用水稀释配制

成浓度分别为2.5ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合标准系列工作

溶液。临用现配。

5.6微孔滤膜：0.22μm，有机系。

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5.7通过式亲水亲脂平衡固相萃取柱：60mg/3mL，或性能相当者。

6仪器设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。

6.2天平：精度0.01mg和0.01g。

6.3涡旋振荡器：转速不低于1500r/min。

6.4离心机：转速不低于4000r/min。

6.5涡旋混合器。

7样品

按GB/T20195制备样品，至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀，装入

密闭容器中，备用。选取类型相同、均匀一致，且在待测物保留时间处的仪器响应值小于方法定量限30%

的饲料样品，作为空白样品。

8试验步骤

8.1提取

平行做两份试验。称取试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，准确加入10.0mL乙腈，涡旋混

匀1min，振荡提取10min，4000r/min离心5min，移取上清液于另一离心管中。重复提取一次，合并

上清液，混匀，备用。

8.2净化

移取2.0mL备用液（8.1）过固相萃取柱（5.7），收集滤出液于10mL离心管中，充分混匀。准确移

取0.25mL滤出液，加水定容至1mL，涡旋混匀，微孔滤膜（5.6）过滤，待测。

8.3基质匹配标准系列溶液的制备

称取空白试样，按照8.1和8.2处理得到空白基质溶液，准确移取混合标准系列工作溶液（5.5）各100

µL，采用空白基质溶液定容至1.0mL，涡旋混合30s，配制成浓度为0.25ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、

5ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的基质匹配标准系列溶液，待测。

8.4测定

8.4.1液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a）色谱柱：C18柱，长100mm，内径3.0mm，粒径1.8μm，或性能相当者；

b）流动相：A相为水（5