1、合成培养基(液)基本成分有哪.pdfVIP

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1、合成培育基（液）基本成分有哪些？

合成培育基的种类虽多，但一般均含有氨基酸、维生素、糖类、无机离子和一些其它的协

助性成分。

（1）氨基酸：是合成培育基的主要成分，合成培育基中以必需氨基酸为主。不同种类的细

胞对氨基酸的要求也不同，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必需依靠培育液供应，这几种

氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰

胺时，细胞生长不良而死亡。

（2）维生素：细胞生长代谢中大多数的酶、辅酶是依靠维生素来形成的。在细胞培育中，

尽管血清是维生素重要来源，但是很多培育基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。

（3）糖类：培育基中的碳水化合物包括葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠等，主要供应

细胞生长的能量，也可参加合成蛋白质和核酸。

（4）无机离子：培育基含有平衡盐溶液的钾、钠等无机盐，有些培育基含有微量元素，如

Fe2+、Zn2+、Ca2+等。

（5）其它成分：有时可在少数合成培育基中加入代谢的中间产物、氧化还原剂、三磷酸腺

苷、辅酶A等。为适应某些特殊培育的须要可以补加一些新的成分，如杂交瘤技术中常用的

DMEM培育液，运用时还须要补加丙酮酸钠和2-巯基乙醇。

2、平衡盐溶液

平衡盐溶液（BSS）是组织细胞培育中常用的基本液体。它可以维持渗透压、调整pH值及

供应细胞生存所需的能量和无机离子成分。主要作为合成培育基（液）的基础液及用于洗涤组

织、细胞等。常用的平衡盐溶液有PBS、Hanks液（HBSS）与D-Hanks液等。各种平衡盐溶液

的主要区分在于氯化钠的浓度、离子的浓度及缓冲系统不同，可依据须要选用适当的平衡盐溶

液。

3、消化液

原代培育中欲分散组织、细胞时，传代中欲使细胞脱离附着的底物时均需运用消化液。组

织细胞培育中常用的消化液为胰蛋白酶、EDTA两种溶液，运用时可以单独运用或混合运用。

胰蛋白酶是从动物胰脏分别的一种水解酶，其主要功能为使细胞间的蛋白质水解、细胞分

散。胰蛋白酶分别细胞的实力与细胞种类及细胞的特性有关，不同种类的细胞以及不同数量的

细胞采纳胰蛋白酶消化的时间亦不相同。浓度大、温度高、新配制的胰蛋白酶可使细胞分别速

度增快。胰蛋白酶溶液在pH8.0，温度为37℃时，作用实力最强。

留意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰蛋白酶活力。消化细胞时，加入一些血

清或含血清的培育液，或胰蛋白酶抑制剂能终止胰蛋白酶对细胞的消化作用。

保存条件：配制好的胰蛋白酶溶液必需保存在-20℃冰箱中，以免分解失效。

请在溶解的一周内运用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液

EDTA是一种化学螯合剂，主要作用为能螯合Ca2+、Mg2+，使细胞分别，对细胞毒性小。

常用的浓度为0.02%。

胰蛋白酶和EDTA联合运用可提高消化效率，但需留意EDTA不能被血清中和，运用EDTA

处理细胞后，肯定要用Hanks液冲洗干净，因残留的EDTA会影响细胞生长。

4、液体培育基怎么保存？

（1）液体培育基应于4℃冰箱避光保存，试验前需放入37℃预热再用。

（2）未加血清液体培育基存放期为12个月，加入血清的液体培育及存放期为6个月。

（3）液体培育基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而渐渐分解。假如细胞生长不良，

可以再添加适量L-谷氨酰胺。

5、液体培育基偶然被冻，可否接着运用？

假如细胞培育基偶然被冻，您应当溶化培育基并视察是否有沉淀产生。假如没有沉淀产生，

培育基可以正常运用，假如出现沉淀，只能丢弃这些培育基。

6、培育基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？

大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，假如次数更多都会在包含蛋白的溶液引起肯定水

平的降解和沉淀，将会影响它的性能。

7、为什么有的培育基中要去掉酚红？

酚红在培育基中被用来作为pH值的指示剂，桃红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色

表示碱性pH。但是酚红具有肯定的固醇类激素样的作用，如雌激素样作用，尤其对于所培育的

哺乳类动物细胞，可能发生的固醇类反应不行忽视。为了避开酚红干扰检测结果，很多探讨人

员视状况不同来选择是否运用含酚红的培育基。

8、培育基中丙酮酸钠的作用是什么？

细胞通常以葡萄糖作为碳源，