枸杞中生物碱 N-反式阿魏酸酪酰胺及 N-反式阿魏酰真蛸胺的含量测定 高效液相色谱法-标准草案修改.docx

枸杞中生物碱N-反式阿魏酸酪酰胺及N-反式阿魏酰真蛸胺的含量测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了枸杞中生物碱N-反式阿魏酸酪酰胺和N-反式阿魏酰真蛸胺的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于枸杞（鲜、干果）中生物碱N-反式阿魏酸酪酰胺和N-反式阿魏酰真蛸胺的高效液相色谱法测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义

本文件没有需要规定的术语和定义。

4原理

试样中的生物碱类物质用70%甲醇溶液超声提取，通过碱性氧化铝固相萃取柱过滤，用高效液相色谱检测和确证，外标法定量。

5试剂与材料

除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。

5.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.3磷酸（H3PO4）：色谱纯。

5.4N-反式阿魏酸酪酰胺（N-trans-Feruloyltyramine，CAS号66648-43-9）、N-反式阿魏酰真蛸胺（N-trans-Feruloyloctopamine，CAS号66648-44-0），纯度≥95.0%或经国家认证

并授予标准物质证书的标准物质。

5.5碱性氧化铝固相萃取柱（100-200目）

5.6标准溶液配制

5.6.1标准储备溶液：分别准确称取适量的N-反式阿魏酸酪酰胺、N-反式阿魏酰真蛸胺标准品（精确至0.01mg），用甲醇溶解，分别配制成1mg/mL的标准储备溶液，-4℃下保存。

5.6.2混合标准中间溶液：分别取N-反式阿魏酸酪酰胺和N-反式阿魏酰真蛸胺的标准储备溶液适量，用甲醇稀释成0.01mg/mL的混合标准中间溶液，-4℃下保存。

5.6.3标准工作溶液：吸取1mL混合标准中间溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

5.770%甲醇溶液（体积分数）：量取70mL甲醇，用水定容至100mL。

5.80.03%磷酸水溶液（体积分数）：量取0.3mL磷酸，用水定容至1000mL。

6仪器与设备

6.1高效液相色谱仪：配有UV检测器。

6.2分析天平：感量0.00001g。

6.3高速万能粉碎机：15000r/min。

6.4超声波清洗机。

6.5涡旋混合器。

7分析步骤

7.1试样的制备

枸杞样品于-18℃冷冻冰箱中保存。试验时将鲜、干枸杞样品取出，鲜样用高速组织捣碎机打浆，干样用高速万能粉碎机（可加少量的液氮）粉碎（30g样品粉碎时间为30s），分别置于样品瓶中，-18℃冷冻备用。

7.2试样的提取

准确称取试样1g（精确至0.1mg），具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液（5.7）10mL，密塞，称定重量，充分振摇混匀，超声提取30分钟，放冷，用70%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置碱性氧化铝固相萃取柱上，滤过，滤液置2ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，待上机测定。

7.3测定

9精密度

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18柱，填料粒径为5μm，250mm×4.60mm，或性能相当者；

b）柱温：30℃;

c）流速：1mL/min；

d）流动相：A相为0.03%磷酸水（5.8），B相为乙腈，（A相:B相为65：35）；e）进样量：5μL。

f）检测波长：318nm。7.3.2定量测定

取标准工作溶液和试样溶液分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积，根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积，对试样溶液的色谱峰根据保留时间进行定性，外标法定量，平行测定两次。

7.4空白试验

除不加入试样外，其他过程与试样处理相同。

8结果计算和表达

试样中N-反式阿魏酸酪酰胺、N-反式阿魏酰真蛸的含量以质量分数计，数值以微克每克(μg/g）计，按式（1）计算：

ω=

P×V

m

（1）

式中：

——试样中被测物的含量，单位为微克每克(μg/g）；

P——试样溶液中被测物的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL）；

V——试样中置碱性氧化铝固相萃取柱上的溶液体积，单位为毫升（mL）；m——试样质量的数值，单位