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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T1961.7—2013
出口食品过敏原成分检测
第7部分:实时荧光PCR方法检测
胡萝卜成分
Detectionofallergencomponentsinfoodforexport—
Part7:RealtimePCRmethodfordetectingcarrotcomponents
2013-03-01发布2013-09-16实施
中华人
中华人民共和国
SN/T1961.7—2013
前言
SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分:——第1部分:酶联免疫法检测花生成分;
——第2部分:实时荧光PCR方法检测花生成分;
——第3部分:酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分;——第4部分:实时荧光PCR方法检测腰果成分;
——第5部分:实时荧光PCR方法检测开心果成分;——第6部分:实时荧光PCR方法检测胡桃成分;
——第7部分:实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分;——第8部分:实时荧光PCR方法检测榛果成分;
——第9部分:实时荧光PCR方法检测杏仁成分;
——第10部分:实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分;——第11部分:实时荧光PCR方法检测麸质成分;
——第12部分:实时荧光PCR方法检测芝麻成分;
——第13部分:实时荧光PCR方法检测小麦成分;
——第14部分:实时荧光PCR方法检测鱼成分;
——第15部分:实时荧光PCR方法检测芹菜成分;
——第16部分:实时荧光PCR方法检测芥末成分;
——第17部分:实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分;————第18部分:实时荧光PCR方法检测荞麦成分;
——第19部分:实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第7部分。
本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本部分起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本部分主要起草人:孙敏、高宏伟、林超、刘彩霞、陈颖、袁飞。
SN/T1961.7—2013
出口食品过敏原成分检测
第7部分:实时荧光PCR方法检测
胡萝卜成分
1范围
SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原胡萝卜成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原胡萝下卜成分的定性检测。
本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%(质量分数)。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
过敏原allergen
又称致敏原或变应原,是指能够引起变态反应的抗原。
3.2
胡萝卜carrot
又称甘荀,是伞形科胡萝卜属二年生草本植物,以肉质根作蔬菜食用。
3.3
实时荧光PCRrealtimefluorescentPCR
是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。3.4
Ct值cyclethreshold
每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
4方法提要
样品经研磨后,提取DNA,以DNA为模板,采用胡萝卜抗冻蛋白基因特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增,根据Ct值,判断样品中是否存在过敏原胡萝卜成分。
5试剂盒和材料
除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。所有试
2
SN/T1961.7—2013
剂均用无DNA酶污染的容器分装。
5.1胡萝卜成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。
表1试验用引物和探针
名称
序列(5-3)
目的基因
内参照5’端引物
内参照3’端引物
内参照探针
TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA
AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT
FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-
TAMRA
真核生物1
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