DB21 2394-2014 食品安全地方标准 鸡肝和鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺的检测 超高效液相色谱串联质谱法.docxVIP

DB21

辽宁省地方标准DB21/2394-2014

食品安全地方标准

鸡肝和鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺的检测

超高效液相色谱串联质谱法

2014-12-29发布2015-06-29实施

辽宁省卫生和计划生育委员会发布

DB21/2394-2014

前言

本标准由辽宁省卫生和计划生育委员会发布。

本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。

本标准主要起草人：张秀芹、何为、杜柏林、刘雪红、刘笑、苗翠、徐丽佳、张天姝、韩春晓、李云龙、杨慧杰。

DB21/2394-2014

辽宁省食品安全地方标准

鸡肝和鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺的检测

超高效液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了鸡肝、鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺残留量的超高效液相色谱串联质谱检测方法。本标准适用于鸡肝、鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺残留量的检测。

2原理

试样中的金刚烷胺和金刚乙胺，采用1%三氯乙酸和甲醇混合溶液提取，混合型阳离子交换回相萃取（MCX）小柱净化，采用液相色谱串联质谱仪测定，基质添加外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂

3.1.1金刚烷胺、金刚乙胺对照品纯度≥99.0%。

3.1.2甲醇(色谱纯)3.1.3盐酸

3.1.4氨水

3.1.5异丙醇

3.1.6三氯乙酸

3.2试剂配制

3.2.11%三氯乙酸：取1g三氯乙酸加入100mL水，完全溶解。

3.2.2提取液：1%三氯乙酸+甲醇，以体积比1：1混匀。

3.2.3洗脱液：氨水：甲醇：异丙醇（V:V:V）＝5：90：5。

3.2.4复溶液：甲醇：水：甲酸(V:V:V)＝10：90：0.2。

3.2.52%盐酸水溶液：取2mL盐酸加入98mL的水中，混匀。

3.2.6高纯氮气：纯度99.99%。

3.2.7高纯氩气：纯度99.99%。

3.3标准品

3.3.1金刚烷胺对照品纯度≥99.0%。

3.3.2金刚乙胺对照品纯度≥99.0%。

3.4标准溶液配制

DB21/2394-2014

3.4.1金刚烷胺、金刚乙胺标准贮备液(100.0μg/mL):取标准品各10mg，用甲醇溶解并定容至100mL。贮存于－20℃冰箱中，有效期30天。

3.4.2金刚烷胺、金刚乙胺工作液配制：工作液用甲醇稀释，现用现配，上机用标准品浓度根据样品浓度配制。

4仪器和设备

4.1离心机：高速低温离心机，离心转速10000rpm/min。

4.2分析天平：感量0.01g和感量0.00001g。

4.3移液器及配套枪头：单道10μL～1000μL。

4.4绞肉机。

4.5超声波发生器。

4.6涡旋振荡器。

4.7液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾电离源。

4.8SPE小柱：WatersOasisMCX（60mg/3mL）。

4.91mL注射器。

4.100.22μm水性滤膜。

5分析步骤

5.1试样的制备

取新鲜鸡肉、鸡肝脏组织，去除脂肪和筋膜后，分别绞碎并均质，－20℃贮存备用。

5.2仪器参考条件

5.2.1色谱条件

色谱柱：C18柱，50×2.1mm,1.7um.流动相：A相:0.2%甲酸水溶液

B相：甲醇柱温:30℃。

进样量：5μL洗脱程序见表1。

DB21/2394-2014

表1洗脱程序

时间min

流速(mL/min)

A相%

B相%

――

0.3

90

10

1

0.3

20

80

3.1

0.3

20

80

3.2

0.3

90

10

4.0

0.3

90

10

5.2.2质谱条件

离子源：电喷雾离子源

电离方式：正离子电离ESI+。监测模式：MRM

毛细管电压：3.5KV

脱溶剂温度：350℃

脱溶剂气流量：600L/H锥孔气流量：50L/H

质谱采集参数见表2。

表2金刚烷胺、金刚乙胺质谱采集参数

化合物

母离子（m/z）

子离子（m/z）

锥孔电压(V)

碰撞能量(eV)

金刚烷胺（amantadine）

152.0

152.0＞135.0

36

28

152.0＞92.9

36

18

金刚乙胺（Rimantadine）

180.0

180.0＞163.0

36

28

180.0＞80.9

36

28

5.3标准曲线配制

取空白样品6份，每份约2.00g，加入适量的标准品，制备成含金刚烷胺1.0ng/g、3ng/g、

5ng/g、10ng/g、3