血清和关节液中YKL对骨性关节炎.ppt

研究方法（1）

——病例选择病例来源：山医二院骨科行膝关节镜检查和膝关节置换术的患者。择入标准:非发育期患者（年龄＞18岁）；排除肝肾疾病、全身感染和癌症等的患者；体液标本采集前两月未使用糖皮质激素类药物的患者。样本含量：≥60例。第31页,共50页，星期六，2024年，5月研究方法（2）

——体液标本的采集、预处理、储存和检测体液标本的采集、储存前处理、储存和取用、以及检测前处理和检测，应依据课题技术规范进行。本课题相关技术规范主要参考《PooleR.NIHWhitePaper:Biomakers,theOsteoarthritisInitiative(ABasisforDiscussion).Ferbruary3rd,2000.》制定。第32页,共50页，星期六，2024年，5月技术规范（1）

——体液标本的采集体液标本的采集规范血液标本在清晨6-8时空腹抽取静脉血5ml，留存于无菌非抗凝试管中送检。并应限制病人在采集标本前活动。关节液标本在行关节镜手术时麻醉后采集：抽取关节液原液留存于无菌非抗凝试管中（尽量多抽取）。第33页,共50页，星期六，2024年，5月技术规范（2）

——体液标本的储存前处理体液标本均应在采样后2小时内进行离心处理：血清标本：在至少×600g，3000rpm，10分钟的条件下离心。关节液标本：在×2500g，4℃，15分钟的条件下离心。（4500rpm，20min）第34页,共50页，星期六，2024年，5月技术规范（3）

—体液标本的储存和取用体液标本的储存标本离心后取上清液，经快速冷冻后,-70℃条件下冻存。体液标本的取用在室温下复温解冻。标本避免反复冻融。第35页,共50页，星期六，2024年，5月技术规范（4）

——体液标本检测前处理和检测体液标本的检测前处理关节液标本应先经离心后，取上清液测定其含量；血清标本不需进行特殊处理。体液标本的检测ELISA法。第36页,共50页，星期六，2024年，5月研究方法（3）

——其它相关资料的收集临床资料一般资料；临床症状、体征；问卷调查：WOMAC指数实验室检查资料常规项目，血清Ⅳ型胶原。X线资料关节间隙的宽度；KellgrenLawrence分级。手术资料关节软骨损伤和滑膜炎程度的评分；手术录像资料。第37页,共50页，星期六，2024年，5月技术规范（5）

——手术资料收集的注意事项手术中对关节内组织的病变程度进行评价：关节软骨损伤：Outerbridge膝关节软骨损伤评分法；滑膜炎：Ayral膝滑膜炎评分法。术中对病变部位用探钩进行相对测量，并注意留存录像资料。第38页,共50页，星期六，2024年，5月研究方法（4）

—OA病变程度的对照评价标准关节组织的关节镜征象评价标准关节软骨退变程度：Outerbridge法；滑膜炎程度：Ayral膝滑膜炎评分法。OA病变程度的X线征象评价标准KellgrenLawrence分级；负重位的膝关节间隙宽度。OA病变程度的患者自我评估标准WOMAC骨性关节炎指数。第39页,共50页，星期六，2024年，5月研究方法（5）

—统计学处理使用SPSS11.0软件进行统计学分析OA组和非OA组之间体液YKL-40水平的比较用多元协方差分析。体液YKL-40水平与关节镜下相关组织的病变程度评分之间用多元线性回归。体液YKL-40水平与膝关节间隙宽度或WOMAC评分间用相关分析。第40页,共50页，星期六，2024年，5月可能遇到的问题及解决办法标本的采集、预处理和检测等的标准化严格依据课题技术规范进行，才能保证结果的有效性和可比性。混杂因素的控制探讨血清YKL-40水平对OA诊断价值的关键。第41页,共50页，星期六，2024年，5月混杂因素的控制（1）生物节律影响的控制血液标本的采集在固定时间（清晨6-8时）进行。肠蠕动影响的控制血液标本在清晨空腹时采集。体育活动影响的控制采集血液标本前限制病人的体育活动。第42页,共50页，星期六，2024年，5月混杂因素的控制（2）肝肾等疾病影响的控制选择肝肾功能均正常的病例；若样本含量不足时，用统计学方法进行控制。经术前检查可排除全身感染和肿瘤等的影响。年龄和性别影响的控制采用统计学方法进行控制。第43页,共50页，星期六，2024年，5月混杂因素的控制（3）手术影响的控制由于体液标本是在麻醉后手术前采集的，故麻醉的影响可忽略。药物因素影响的控制采集标本前两月内未使用糖皮质激素类药物。第44页,共50页，星期六，202