蛋白质合成分离.ppt

6.双缩脲法蛋白质含有两个以上肽键，因此有双缩脲反应。碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色化合物，其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，于540nm比色。该反应受温度影响大。此外，酰胺键、氨基、-CS-NH2对反应有干扰。该法快速。第127页,共128页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第128页,共128页，星期六，2024年，5月第95页,共128页，星期六，2024年，5月离子交换纤维素是人工合成的纤维素衍生物，其解离基团可与带电荷的蛋白质交换达到分离纯化。⑴羧甲基纤维素（CM-纤维素）带羧甲基基团（纤OCH2COOH），是一种阳离子交换剂。在中性pH条件时，羧甲基上的质子可解离下来，与溶液中带正电荷的蛋白质交换。2.离子交换柱色谱法纤维素颗粒

或琼脂糖O

CH2CH2

O-

第96页,共128页，星期六，2024年，5月⑵二乙氨基乙基纤维素(DEAE-纤维素)这是一种阴离子交换剂（纤OCH2CH2N+（C2H5）2，在中性pH条件时，它含有带正电荷的基团，可与带负电荷的蛋白质交换。纤维素颗粒

或琼脂糖H+C2H5

CH2CH2N

C2H5

第97页,共128页，星期六，2024年，5月离子交换树脂第98页,共128页，星期六，2024年，5月离子交换树脂结构第99页,共128页，星期六，2024年，5月离子交换原理第100页,共128页，星期六，2024年，5月第101页,共128页，星期六，2024年，5月离子交换器第102页,共128页，星期六，2024年，5月⑶亲和色谱据酶与底物专一结合的原理，设计配基，使其能专一与酶结合，再与惰性载体连接，制成亲和层析柱。效率特别高。如伴刀豆球蛋白A的纯化，伴刀豆球蛋白A对葡萄糖有专一性亲和吸附，将葡萄糖连接到琼脂糖凝胶上，再行纯化。CH2CH2CH2被吸附的蛋白质分子琼脂糖颗粒特异的配体连接臂第103页,共128页，星期六，2024年，5月交联壳聚糖接枝L-Hyp亲和吸附树脂羟脯氨酸（L-Hyp）是合成治疗皮肤病、关节炎、肿瘤、减肥及促进伤口愈合等药物的原料，需求量不断增加。目前的生产方式：以离子交换树脂从酸水解胶原蛋白液中分离、洗脱结晶制得。离子交换分离精度低，需多根树脂柱连续分离才能获得产品，产生大量含氨基酸的洗脱废液。第104页,共128页，星期六，2024年，5月壳聚糖及其交联微球制备壳聚糖分子：以氢键连接，比表面积小，传质阻力大，机械强度低交联壳聚糖微球：席夫键连接，布满微孔，传质阻力小，适当机械强度。第105页,共128页，星期六，2024年，5月第106页,共128页，星期六，2024年，5月第107页,共128页，星期六，2024年，5月第108页,共128页，星期六，2024年，5月亲和分离氨基酸对L-Hyp0.58mmol/g，对Pro0.24mmol/g动态吸附交换容量0.58mmol/g，对Gly、Phe、Pro动态交换容量依次为0.09、0.08、0.24mmol/g，基本不交换其它氨基酸，可以一次性获得以Hyp和Pro两氨基酸为主的混合物。第109页,共128页，星期六，2024年，5月第110页,共128页，星期六，2024年，5月第111页,共128页，星期六，2024年，5月第112页,共128页，星期六，2024年，5月第113页,共128页，星期六，2024年，5月⑷高效（压）液相色谱（HPLC）快速、灵敏、分辨率高、自动化程度高等优点。⑸疏水色谱使用疏水凝胶作分离介质，高浓度盐情况下，蛋白质疏水性增加，与疏水介质结合。然后逐渐降低盐浓度，不同蛋白质因疏水性不同依次被洗脱而达到纯化目标。第114页,共128页，星期六，2024年，5月反胶束萃取蛋白质反胶束(reversemicelles):表面活性剂在有机溶剂中形成的内核含微量水分的纳米级球形体。反胶束的形态：球形或近似球形，也有呈柱状。极性核(polarcore):表面活性剂分子自组装形成的亲水性内环境。微水相或“水池”(waterpool)：反胶束内溶解的水。第115页,共128页，星期六，2024年，5月A B 第116页,共128页，星期六，2024年，5月基本性质内水池直径d：反胶束的大小与溶剂和S的种类与浓度、温度、I等因素有关，一般为