农业部2630号公告-15-2017 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆 SHZD32-1及其衍生品种定性PCR方法.docxVIP

ICS65.020.01B04

中华人民共和国国家标准

农业部2630号公告一15—2017

转基因植物及其产品成分检测

耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种

定性PCR方法

Detectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—

QualitativePCRmethodforherbicide-tolerantsoybeanSHZD32-1

anditsderivates

2017-12-25发布2018-06-01实施

中华人民共和国农业部

发布

I

农业部2630号公告—15—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由农业部科技教育司归口。

本标准起草单位：农业部科技发展中心、浙江省农业科学院、上海交通大学、安徽省农业科学院。

本标准主要起草人：汪小福、李文龙、徐俊锋、沈平、杨立桃、陈笑芸、徐晓丽、彭城、刘慧、马卉、秦瑞英。

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农业部2630号公告—15—2017

转基因植物及其产品成分检测

耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种定性PCR方法

1范围

本标准规定了转基因耐除草剂大豆SHZD32-1转化体特异性普通PCR和实时荧光PCR两种检

测方法。

本标准适用于转基因耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种，以及制品中SHZD32-1转化体成

分的定性PCR检测。PU

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

农业部1485号公告-4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

农业部2031号公告8-2013/转基因植物及其产品成分检测大豆内标准基因定性PCR方法

农业部2031号公告19-20,3转基因植物及其产品成分检测抽样

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

3术语和定义

农业部2031号公告8-2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件工3.1

SHZD32-1转化体特异性序列event-specificsequenceofSHZD32

SHZD32-1外源插入片段5端与大豆基因组的连接区序列，包括大豆基因组部分序列与转化载体T-DNA部分序列

4原理

根据转基因耐除草剂大豆SHZD321

转化体特异性序列设计特异性引物及探针，对试样进行

PCR扩增。依据是否扩增获得预期的DNA

片段或典型扩增曲线，判断样品中是否含有SHZD32-1转

化体成分。

5试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的二级水。

5.1琼脂糖。

5.210g/L溴化乙锭(EB)溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。

警告——溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。

注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。

5.310mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加水定容到200mL。

5.4500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加

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农业部2630号公告—15—2017

入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(5.3)直至EDTA-Na?完全溶解，用氢氧化钠溶液(5.3)调pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.51mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸(Tris-HCl)溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌

20min。

5.6TE缓冲液(pH8.0):分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液(5