GB_T 36194-2018金鱼造血器官坏死病毒检测方法.docxVIP

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中华人民共和国国家标准

GB/T36194—2018

金鱼造血器官坏死病毒检测方法

Detectionmethodofgoldfishhaematopoieticnecrosisvirus

2018-05-14发布2018-12-01实施

国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会

发布

Ⅰ

GB/T36194—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。

本标准起草单位:全国水产技术推广总站、中国检验检疫科学研究院、北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人:李清、王娜、谷强、张旻、景宏丽、吴绍强、张利峰、江育林、陈浩楠。

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GB/T36194—2018

金鱼造血器官坏死病毒检测方法

1范围

本标准规定了金鱼造血器官坏死病毒(鲤疱疹病毒2型)的PCR检测、荧光PCR检测和综合判定方法。

本标准适用于金鱼造血器官坏死病毒的鉴定,用于金鱼造血器官坏死病毒引起的相关疾病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出入境动物检疫采样

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CyHV:鲤疱疹病毒(cyprinidherpesvirus)

CyHV-2:鲤疱疹病毒2型(cyprinidherpesvirus2)

GFHNV:金鱼造血器官坏死病毒(goldfishhaematopoieticnecrosisvirus)dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)

bp:碱基对(basepair)

Ct:循环阈值(cyclethreshold)

CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammoniumbromide)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)

Tris:三(羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]

4试剂和材料

除非另有说明,仅使用分析纯试剂。

4.1水:应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2TaqDNA聚合酶:5U/μL。-20℃保存,避免反复冻融或温度剧烈变化。

4.3dNTP:含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10mmoL/L,-20℃保存。

4.4引物:浓度为10μmoL/L,-20℃保存。

a)CyHV引物

1)CyHVpol-F:5-CCCAGCAACATGTGCGACGG-3

2)CyHVpol-R:5-CCGTARTGAGAGTTGGCGCA-3

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GB/T36194—2018

3)扩增CyHV(1型、2型和3型)DNA聚合酶基因中362bp的片段。

b)CyHV-2引物

1)CyHV-2Hel-F:5-GGACTTGCGAAGAGTTTGATTTCTAC-3

2)CyHV-2Hel-R:5-CCATAGTCACCATCGTCTCATC-3

3)扩增CyHV-2解旋酶基因中366bp的片段。

c)荧光PCR用引物和探针

1)正向引物:5-TCGGTTGGACTCGGTTTGTG-3

2)反向引物:5-CTCGGTCTTGATGCGTTTCTTG-3

3)探针:5-FAM-CCGCTTCCAGTCTGGGCCACTACC-BHQ1-3

4.5无水乙醇:使用前预冷到-20℃。

4.6琼脂糖:电泳纯。

4.710×PCR缓冲液(含Mg2+,25mmoL/L):随TaqDNA聚合酶提供,-20℃保存。

4.8荧光PCR2×预混合液(2×supermix):-20