皮肤复合移植毛囊再生的实验研究.doc

1、项目名称：皮肤复合移植毛囊再生的实验研究

2、研究工作对浙江经济、社会和科技发展的意义（纯基础研究需结合科学研究发展趋势来论述其科学意义及举例说明对浙江省科技工作的带动作用；应用基础研究和基础性工作需结合浙江省实现可持续发展所需解决的关键科技问题来论述其作用并举例说明）；

3、本项目研究目标及与申请者研究工作长期目标的关系；

4、项目研究内容，研究方案和进度安排（包括有关方法、技术路线、实验手段、关键技术等说明，年度研究计划）；

研究内容

构建C57Bl/6J小鼠深层皮肤损伤模型，分为异种脱细胞真皮基质移植组、自体刃厚皮移植组、异种脱细胞真皮基质与刃厚皮复合移植组和非移植组；

构建构建高表达Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11逆转录病毒载体；

将质粒逆转录病毒载体涂抹于动物模型创面，探讨Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11体内促毛囊再生作用；

采用双向电泳结合质谱分析研究各实验组创面蛋白质表达图谱的差异，以找出与毛囊再生相关的关键蛋白；

采用gene-fishing技术分析研究各实验组创面基因表达的差异，以找出与毛囊再生相关的关键基因。

技术路线

Wnt-4、

Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11靶位的选择

Wnt-4

Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11逆转录病毒载体的构建与鉴定

?

构建C57Bl/6J

构建C57Bl/6J小鼠深层皮肤损伤模型

非移植组异种脱细胞真皮基质移植组自体刃厚皮移植组复合移植组

非移植组

异种脱细胞真皮基质移植组

自体刃厚皮移植组

复合移植组

将

将逆转录病毒载体涂抹于动物模型创面，分别于7、14、21、30、40、90至创面完全愈合提取创面组织标本

Wnt-4、Wnt-5a、

Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11表达检测

计算毛囊生长率创面毛囊再生机制研究?

计算毛囊生长率

创面毛囊再生机制研究

采用RT-PCR、流式细胞仪、

采用RT-PCR、流式细胞仪、Western－blot检测Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11的表达情况

电镜观察毛囊再生过程中超微结构的变化组织化学染色观察皮肤干细胞分化增值情况gene-fishing技术分析研究各实验组创面基因表达的差异，以找出与毛囊再生相关的关键基因采用双向电泳结合质谱分析研究各实验组创面蛋白质表达图谱的差异，以找出与毛囊再生相关的关键蛋白

电镜观察毛囊再生过程中超微结构的变化

组织化学染色观察皮肤干细胞分化增值情况

gene-fishing技术分析研究各实验组创面基因表达的差异，以找出与毛囊再生相关的关键基因

采用双向电泳结合质谱分析研究各实验组创面蛋白质表达图谱的差异，以找出与毛囊再生相关的关键蛋白

研究方案

第一部分：构建C57Bl/6J小鼠深层皮肤损伤模型，分为异种脱细胞真皮基质移植组、自体刃厚皮移植组、异种脱细胞真皮基质与刃厚皮复合移植组和非移植组；

构建构建高表达Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11逆转录病毒载体；

将质粒逆转录病毒载体涂抹于动物模型创面，探讨Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11体内促毛囊再生作用；

采用双向电泳结合质谱分析研究各实验组创面蛋白质表达图谱的差异，以找出与毛囊再生相关的关键蛋白；

采用gene-fishing技术分析研究各实验组创面基因表达的差异，以找出与毛囊再生相关的关键基因。

5、项目创新之处（学术意义）（在分析相关研究现状的基础上重点阐述）；

6、工作基础与工作条件（与本项目相关的研究工作积累，已具备的研究支撑条件）；

7、预期研究结果及其利用研究结果的计划和今后发展的思路（阐述研究结果的形式，以及准备如何充分利用可能得到的研究结果和今后打算通过什么资