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ABC食品有限公司
生效日期：2014-10-20大肠菌群计数测定作业指导书页码：1/1
1.0目的
规定大肠杆菌计数的方法。
2.0适用范围
适用于加多宝凉茶、浓缩汁或原辅材料中的大肠杆菌群的计数。
3.0术语
3.1大肠菌群：一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧格兰仕
隐形无芽孢杆菌。
3.2MPN最可能数（mostprobablenumber）：基于泊松分布的一种间接计数方法。
4.0职责
4.1质检部：负责按此方法对加多宝来凉茶、浓缩汁或原辅材料中大肠菌群进行计数。
5.0流程图
见附录A、附录B。
6.0内容及要求
6.1设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：
6.1.1恒温培养箱：36℃±1℃
6.1.2冰箱：2℃-5℃
6.1.3恒温水浴箱：46℃±1℃
6.1.4天平：感量0.1g
6.1.5振荡器
6.1.6无菌吸管：1ml（具0.01刻度）、10ml（具0.1刻度）或微量移液器及吸头。
6.1.7无菌锥形瓶：容量500ml
6.1.8无菌试管：18×200ml
6.1.9小导管
6.1.10无菌培养皿：直径90mm
6.1.11菌落计数器
6.2培养基和试剂
6.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤
6.2.2煌绿乳糖胆盐（BGLG）肉汤
6.2.3乳糖胆盐发酵培养基（LBB）
6.2.4乳糖蛋白胨培养基（LPB）
6.2.5伊红美蓝琼脂培养基（EMB）
6.2.6结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
6.2.775%乙醇溶液
6.2.8无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min
6.3大肠菌群MPN计数法
6.3.1加多宝凉茶、浓缩汁等产品及原辅材料中大肠菌群的测定
6.3.1.1样品稀释
a、固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225ml无菌生理盐水的无菌均质袋中，
ABC食品有限公司
生效日期：2014-10-20大肠菌群计数测定作业指导书页码：1/1
用拍击式均质器拍打1-2min，制成1：10的样品匀液。
b、液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置于盛有225ml的无菌生理盐水的无菌锥
形瓶中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。
c、用1ml无菌吸管吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐
水的试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，制成1：100
的样品匀液。
d、根据对样品污染状况的分析，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀
液。注意每递增稀释一次，换用一支1ml无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种
完毕，全过程不得超过15min。
6.3.1.2初发酵试验
a、每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），
每个稀释度接种3管月桂基硫酸胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（如果接
种量超过1ml，则用双料LST肉汤）。
b、将以上接种好的试管置于36±1℃培养24±2h，观察导管内是否有气泡产生，如
未产气则继续培养至48±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数
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