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大肠杆菌的检测(MPN计数法)

食品微生物检验技术课程综述

大肠杆菌的检测（MPN计数法）

院系：食品科学与药学学院

班级：食科114

姓名：张花

学号：114031431

组长：张军玲

成员：张花

赵晶郁

朱娟娟

2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤。

2.2EC肉汤。

2.3蛋白胨水。

2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP-VP实验用）。

2.5磷酸盐缓冲液。

2.6无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高

压灭菌15min。

2.71mol/L氢氧化钠（NaOH)：称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏

水中。

2.81mol/L盐酸（HCI)：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。

3检验程序

4.样品稀释

4.1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有

225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内

(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀

释液。固体检样最好用均质器,以8000-10000r/min的速度处理1～

2min,做成1:10的样品均匀稀释液）。

4.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25ml置盛有225mL磷酸盐缓

冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，充分振摇，制

成1：10的样品匀液。

4.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L

氢氧化钠（NaOH)或1mol/L盐酸（HCI)调节。

4.4用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有

9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释

液。

4.5根据对样品污染状况的估计,按上条操作依次做10倍递增稀

释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。从制备样品匀液至样

品接种完毕，全程不得超过15min。

5检验

5.1接种和培养

选取2~3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种两张

测试片。将测试片置于平坦实验台面上，揭开上层膜，用吸管吸取样

品匀液1ml垂直地价在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气

泡产生和上层膜直接落下，将压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下，

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是样品匀液覆盖与圆形的培养膜表面，切勿扭转压板。拿起压板，静

置至少1min意识培养基凝固。将测试片的透明面朝上放于36℃的培

养箱内，地跌层数不超过20片，肉、家禽和水产品，培养时间为24

±2h；其他食品培养时间为48±2h。

5.1判读

可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、Petrifilm自动判读

仪计数。蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌，不论蓝色的深浅，部分

蓝色的带气泡菌落也判定为大肠杆菌。圆形培养膜边缘及边缘以外的

菌落不计数。当测试片出现大量气泡、不明显的小菌落，培养区成蓝

色时，需要进一步稀释样品匀液，重新检验。

6大肠杆菌测试片技术的报告

选择菌落数在15~150之间的稀释度，两张测试片菌落平均乘以

稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠杆菌数，以CFU/g(CFU/ml)

表示。

如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15，计数最低稀释度

测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如果所有稀释度测试片上

均无菌落生长，以“小于1乘以最低稀释倍数”报告；如果所有稀释

度的菌落数都大于150，计数最高稀释度测试片上的平均菌落数乘以

稀释倍数报告。技术菌落数大于