中药饮片及检验知识培训课件.pptVIP

中药饮片及检验知识培训5.参数5.1温度

薄层色谱分析一般在室温中进行。在这过程，温度在20-25oC算不上是临界值。在这过程中无短期的温度波动才是更为重要（避免抽风）。展开室应放置在无直射阳光和不通风处。温度波动对层析结果不利，故将展开室放在靠近窗口或热源处是欠妥的。5.2空气湿度

空气湿度极高或极低主要影响有非极性溶剂体系的无机涂层。相对空气湿度高于70-80%会影响薄层钝化，使Rf值增加。样品点样后，TLC薄层可置放在适当的硫酸和水的混合物的上面不少于30分钟，调整至指定的相对湿度。有关这方面的更多资料可从HPTLCVario系统的操作手册中获得。

另一方面，在样品点样前，TLC/HPTLC板可在105oC再活化30分钟进行干燥。然后薄层必须用一块玻璃板保护起来，只有起点区露出以便于样品点样。

若空气太干燥，可在干燥器中将TLC/HPTLC薄层置于水的上方以达到所要求的状况。

确定合适的层析条件的有效方法（用规定的湿度，溶剂蒸汽或溶剂调整使薄层达到要求的状况）是使用HPTLCVario体系。

控制相对湿度用的硫酸溶液下表：

相对湿度所需硫酸浓度（V/V）

硫酸（ml）+水（ml）

32%47%42%58%65%72%88%68.010050.010057.010039.510034.010027.510010.8100中药饮片及检验知识培训6．层析后衍生作用

若层析板分离的物质肉眼看不见又不能被紫外光活化，需加试剂方能显色或发射荧光者，则需使用适当的试剂浸渍或均匀喷洒于薄层板面上，直接观察或加热显色后观察。加热显色者须注意加热时间和温度，尤其含羧甲基纤维素钠的薄层板，加热温度过高或时间过长，容易引起板面的焦化，如用硫酸等显色剂更易造成板面的炭化而影响显色效果。有的成分加试剂后，如挥发油成分经香草醛硫酸显色，加热温度和时间长短不同或放置时间不同均可能使斑点的显色有所改变。

有的品种可熏以试剂或试液的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）显色。6.1喷雾试剂溶液以气溶胶的形式均匀地喷洒在薄层上。电动的TLC喷雾器用最少的试剂溶液产生几近理想的气溶胶。6.2浸渍使用适当的设备如色谱浸渍设备III（ChromotogramImmersionDeviceIII）,TLC/HPTLC板浸渍具有重现的结果。通过设定垂直方向速度（进入，抽出）和规定停留时间，浸渍条件可被精确地标准化。中药饮片及检验知识培训7．检测7.1定性分析（同一性试验）在相同的状态下（相同类型的TLC/HPTLC板、相同的溶剂体系组成、相同的组份点样体积和其它TLC设备系统），样品成份的Rf值、颜色、与专用的或特殊基因衍生化试剂的反应和参考物或标准物在同一TLC/HPTLC板同时层析所得的结果相符时，未知物就可认为是存在而被鉴别出来。分析的结果可以采用照片，照片复制品，影像记录（如：CAMAG薄层色谱数码成像系统）或TLC扫描仪方法记录下来。

为增加测试物与参照物同一性的可信度，采用TLC扫描仪实时记录其紫外光和可见光图谱并进行比较。7.2定量分析

（仪器：CAMAGscanner-3；具体操作请参考操作手册或教学软件）定量分析采用光密度扫描法来评价。用winCATS软件控制薄层色谱扫描仪以及进行扫描结果的数据处理，计算出各成分的峰高和峰面积及其平均值和离散系数（CV）。通过单水平或多水平校准计算出结果。最后以报告形式将所有扫描参数、原始资料及图像结果保存及打印。

扫描狭缝宽度根据被测成份斑点的大小来调整（1）点状点样得到TLC中各成份，扫描其全宽度；（2）条带状点样，通常可以扫描其色谱带同心部分的50-70%。

物质的扫描波长可以通过光谱扫描来决定。

TLC/HPTLC板空白部位的漫射反射光用光电倍增器（PM）来收集并定其值为10%。扫描吸光物质时，其吸收随着物质的量而增加。

对于具有荧光或可转变成具旋光性衍生物的物质的测定。光源一般使用发射光谱在254-578nm之间的高压汞蒸汽灯，在254，302，313，366，405，436，546和578nm处有特别高强度的谱线。吸收了选择性激发波长后TLC中各成份发射出的较长波长荧光由光倍增器记录下来，使用锐截止滤波器或窄带滤波器将会阻止TLC/HPTLC板反射的激发波长光到达光电倍增器。和吸附测定一样，荧光强度作为板上定位的函数作图得模拟曲线（荧光定位曲线）。TLC扫描仪的测定原理在有关的设备文献中有报导。

荧光测定比吸收测定优越在于如下几点：（1）检出极限低1-3个数量级；（2）在较宽的浓度范围内校准曲线呈线性；（3）选择性较高。中药饮片及检验知识培训中药饮片鉴别及检验相关