原创力文档- 1、本文档共12页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
PAGE1/NUMPAGES1
I型内皮素受体反义寡聚核苷酸抑制VSMC增殖及内膜增生
I型内皮素受体反义寡聚核苷酸抑制VSMC增殖及内膜增生I型内皮素受体反义寡聚核苷酸抑制VSMC增殖及内膜增生作者：
钱济先，张柏根，李桂云，张岚，邓廉夫，朱雅萍【关键词】内皮素关键词:内皮素;反义寡核苷酸;血管平滑肌细胞摘要:目的观察Ⅰ型内皮素受体反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和内膜增生的抑制作用.方法①细胞培养:取家兔主动脉中膜消化后培养传代，经抗-actin鉴定后使用第4～6代传代细胞;②人工合成ODN:经Genbank检索筛选，合成含18bpETA-ODN片段，再对5’端硫代修饰以增加稳定性，同时行峤地高辛标记以检测反义片段的细胞膜穿透性;③MTT分光光度法检测ETA-O刑DN对VSMC增殖的抑制作用;④运用丌放射受体结合分析法了解ODN对ETA绲蛋白表达的抑制作用，以探讨其反义作用坚;⑤兔颈动脉空气干燥模型在体研究OD栲N对血管内膜增生的抑制作用:应用F-雍127凝胶载体携带ETA-ODN导入血管周围，术后不同时间观察增生内膜相醢对厚度.结果ODN于培养后12h进盗入细胞内，并逐渐增加;15molL-1ETA-ODN对VSMC增殖具有涞抑制作用，24h后即有显著作用;ET蓦A-ODN对ETA表达亦有明显的抑制霎作用，表现为CPM于24h逐渐减少;汐ETA-ODN导入后，血管增生内膜相飕对厚度减少.结论ETA-ODN以浓度和时间依赖方式抑制ETA蛋白表达以鹌及VSMC的增殖;反义寡核苷酸是通过裔反义机制实现对ETA蛋白和VSMC增殖的抑制作用.Antisens饥eendothelin┐1recep洛toroligonucleotide濮in┐hibitvascularsm鹗oothmusclecellprol隙iferationandintima薰lhyperplasiaAbs颖tract:AIMToevaluat栩etheinhibitiveeffe╀ctofantisenseendot佑helin-1receptoroli惴gonucleotideonVSMCぷgrowthandintimal①Cellcul-ture.Themed┮iumofrabbitaortawereharvested，digest迄edandthedispersionswerecellsofpassag池e4～6wereroutinelyusedtostudyafteride峤ntificationwith-actinantibody.②ODNa豢ntisensesequencesweredesignedandscreenedthroughGeneban冒ktheseprocedures，E悍ighteenphosphoroth猝ioateantisensecom-夙plementarytoETAcDN泅Aweresynthesized，a栖ndeventuallylabele尾dwithdigoxinbywhic戏hthesequencesstabi嚅litybeaug-mentedan蓝dmembranouspermeabilitytested.③MTTme青thodwasusedtoevaluateDNAsynthesisinO＃DNtreatedVSMC.④125敬I-ET-1radiobinding臃assaytoETAandimmun挟o-histochemistrywe遭reutilizedtoexamin展eprotEInexpression┃ofthereceptor，andt衷odiscussrolesoftheODN.⑤ODNdis-solved巯in200mLL-1F-127gel赈solutionatconcentr黪ationmolL-1wereap致pliedtosurroundthe侉exposedregionofcar汤otidarteryonthebasisofAirDrytheinti-淝malthicknessandlum板inalnarrownesscouldbe①ETA-ODNcouldbe鲥foundinculturedVSM致Cin12han
文档评论（0）