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胞内S-腺苷同型半胱氨酸升高抑制HUVEC增殖和ER-α表达的关系
胞内S-腺苷同型半胱氨酸升高抑制HUVEC增殖和ER-表达的关系【摘要】目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸（S-adenosylhomocysteine，SAH）升高抑制血管内皮细胞增殖和雌激素受体-（estrogenreceptor-，ER-）基因表达变化的关系。
方法以分离的原代人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）为研究对象，经不同浓度的SAH水解酶强效抑制剂3-deazaadenosine（DZA）处理24～72h后，反相高效液相色谱法测定胞内SAH浓度，利用细胞计数法、流式细胞仪和TUNEL技术检测细胞的增殖凋亡能力，Westernblot法检测ER-蛋白的表达，荧光定量-PCR检测其mRNA表达，甲基化特异PCR法检测ER-基因启动子甲基化状态。
结果经DZA处理后，HUVEC胞内SAH浓度升高（P＜0.05），生长增殖能力降低（主要受阻于G1/G0期），凋亡率增加（P＜0.05），ER-mRNA和蛋白的相对表达量降低（P＜0.05），但DZA处理前后ER-基因启动子甲基化状态不发生明显改变。
结论SAH升高抑制HUVEC的增殖能力与ER-的表达变化有关，但这种作用不是通过改变ER-基因启动子的甲基化而实现的。
【关键词】S-腺苷同型半胱氨酸人脐静脉内皮细胞雌激素受体-甲基化Abstract：
ObjectiveToexploretherelationshipofinhibitedproliferativeabilityinducedbyintracellularS-adenosylhomocysteine(SAH)accumulationandexpressionofestrogenreceptor-(ER-)inHUVEC.MethodsAfterisolatedprimaryHUVECtreatedwithout(normal)orwith3-deazaadenosine(DZA),apotentS-adenosylhomocysteinehydrolaseinhibitor,for24-72h,intracellularSAHlevelwasmeasuredwithreversedphasehigh-performanceliquidchromatography(RP-HPLC).TheproliferativeabilityofHUVECwasdetectedwithcytometry,flowcytometryandTUNELmethods.TheexpressionofER-proteinandmRNAwasdeterminedwithWesternblotandquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(qRT-PCR)techniques,respectively.ThepromotermethylationofER-genewasanalyzedwithmethylationspecificPCR(MSP).ResultsTheresultsshowedthatthelevelofintracellularSAHwasincreasedinHUVECincubatedwithDZAcomparedtonormal.TheproliferativeabilityofHUVECweredecreasedandtheapoptoticratewasincreasedaftertreatmentwithDZA(P＜0.05).TherelativeexpressionofER-mRNAandproteininHUVECtreatedwithDZAwaslowerthanthatofnormal(P＜0.05).ButtherewerenoobviouschangesofER-genepromotermethylationinHUVECbeforeandaftertreatmentwithDZA.ConclusionsThesefindingssuggestedthattheinhibitedproliferativeabilityinducedbyintracellularincreasedSAHwasco
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