LabestTM琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒使用说明书.pdf

GUS染色试剂盒使用说明书

保存条件：X-Gluc干粉-20℃保存，其它组分2-8℃保存，未开封保质期24个月。

产品内容：

组分编号产品名称SL7160-50mlSL7160-100ml

SL7160-1X-Gluc溶剂1mL1mL×2

SL7160-2（CX11931）X-Gluc干粉1管2管

SL7160-3GUS染色缓冲液50mL50mL×2

说明书1份

产品说明：

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷

酸酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯

（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X-Gluc）分解为蓝色物质，其检测方法简单、快速、灵敏、

稳定，且背景活性低。因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性，因此GUS基因广泛用作转基因植

物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。

本试剂盒包含GUS染色的全部试剂，使用方便，现将X-gluc溶剂加入X-Gluc干粉内混匀即为颜色液

浓缩液，再将染色液浓缩液和缓冲液按照比例混合即配成GUS染色液。

使用方法：

GUS染色液配制：

1.将X-Gluc溶剂室温或40℃水浴融化后，1mL溶剂加入到1管X-Gluc干粉中，震荡混匀溶解（易溶），

即得50×GUS染色浓缩液。

注意：新鲜配置的染色浓缩液是无色的，-80℃可长期保存。-20℃保存6-12个月。溶液可能会变粉

色或者发红，颜色较浅的可继续使用，过深的应弃用。

2.使用前GUS染色浓缩液用GUS染色缓冲液稀释50倍，即配成GUS染色液。如0.1mLGUS染色浓缩

液加入到5mLGUS染色缓冲液中混匀，即配成5mLGUS染色液。

注意：该染色液最好现用现配，可以-20℃保存2-3天。

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GUS染色步骤：

1.将准备好的材料浸泡在GUS染色液中，于25-37℃保温1小时至过夜（依据转化基因启动子强度以及

材料的幼嫩程度和角质层厚度）。

2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。

3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。

注意：部分绿色材料脱色较慢，可以用无水乙醇或80%丙酮中脱色2-3次，至阴性对照材料为白色。

GUS染色阳性的蓝色斑点很稳定，在酒精中不褪色。

注意事项：

用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶

片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在

染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。

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发表文章：

1.He,Yan,etal.TheOsABCI7transporterinteractswithOsHCF222tostabilizethethylakoidmembranein

rice.PlantPhysiology(2020).（IF7.394）

/10.1104/pp.20.00445

2.Wei,Lian-Huan,etal.Them6AreaderECT2controlstrichomemorphologybyaf