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专业：临床医学________
实验报告姓名：曹静____________
学号：3120102956______
日期：2014.12.15_______
地点：教A401_________
课程名称：病原生物学与免疫学实验指导老师：陈玮_______成绩：______________
实验名称：沉淀反应和补体参与的免疫反应实验类型：___________同组学生姓名：钟一鸣
1.沉淀反应——双向琼脂扩散试验
【实验原理】
双向扩散是将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，
如果抗体和抗原相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体
系统，因其扩散速度不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。观察沉淀线的位置、形状等可对抗
原或抗体作出定性分析。本试验常用于检测抗原抗体的纯度，滴定抗体的效价以及用已知抗
体（抗原）检测和分析未知抗体（抗原）。临床上用此法检测患者血清中的甲胎球蛋白AFP，
作为原发性肝癌的重要诊断指标。双向扩散实验所需时间较长（24h），灵敏度不高。
【实验现象】
沉淀线
Ag对照
Ab
Ag待测AbAg待测
Ag对照
Ag对照
1）.六边形排列孔中，六条沉淀线在抗体孔周围衔接成一个完整的圆形
2）.三角形排列孔中，出现两条沉淀线，且二者相交顶端相连
【实验结果】
待测样本AFP阳性，与阳性对照含有浓度基本相同的AFP
【讨论】
1）.六边形排列孔中出现完整的圆形，说明阳性对照抗原和待测样本抗原浓度基本接近，使
得六个孔中各沉淀线离中央孔的距离接近，围成完整的圆形
2）.三角形和六边形排列孔的沉淀线均较接近中央孔，说明待测抗原和阳性对照抗原的浓度
略大于抗体浓度。
3）.制琼脂板时，不能太薄，且因要打六边形孔，尽量保证边上的孔不能太浅
4）.沉淀线不明显可能和抗原抗体浓度以及放置时间有关，放置时间过短则沉淀线不明显，
过长则会使已经形成的沉淀线解离或散开而出现假阴性
2.免疫电泳试验——对流免疫电泳试验
【实验原理】
带电的胶体颗粒可在电场中移动，移动的方向与胶体颗粒所带的电荷有关，蛋白质抗原
在PH8.6的缓冲液中带负电荷，故由阴极向阳极移动，抗体球蛋白的等电点为PH6-7，故在
PH8.6的缓冲液中带负电荷少，且分子较大，移动缓慢，同时因电渗作用，反向阴极移动，
于是形成抗原与抗体相对移动的情况，在二者相遇的最适比例处产生白色沉淀。此种在双向
免疫扩散的基础上加电泳的方法称为对流免疫电泳。由于抗原、抗体在电场中做定向移动，
限制了琼脂双向扩散时抗原、抗体朝各方向自由扩散，因而提高了实验的敏感度，同时缩短
试验时间，故可作快速诊断。
【实验现象】
AbAgAbAg
注：左侧为阳性对照，右侧为待测组
可见AFP阳性血清孔和抗体孔之间的白色沉淀线，同时待测血清孔和抗体孔之间也有沉淀
线出现
【实验结果】
待测血清为AFP阳性，其内含有甲胎球蛋白。
【实验讨论】
1）抗体球蛋白的电渗力大于其电泳力，使之向负极移动，抗原电泳力大于电渗力，使之向
正极移动，二者相向移动，相遇后形成沉淀线
2）阳性对照及待测组所得的沉淀线均不明显，可能是由于试验前配制的各血清及抗体溶液
的浓度不完全合适所致，过浓或过稀
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