原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
小动物活体成像常见问题及分析--第1页
小动物活体成像常见问题及分析
小动物活体成像常见问题及分析
1.荧光素酶的发光是否需要激发光？底物荧光素(Luciferin)是如
何进入小鼠体
内的？需要多少？
荧光素酶的发光是生物发光，不需要激发光，但需要底物荧光素
(D-Luciferin)。荧光素酶有554个氨基酸，约50KD。荧光素酶的底物
荧光素，约280道尔顿。荧光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易
穿透细胞膜和血脑屏障。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠
体内的，约一分钟就可以扩散到小鼠全身。大部分发表的文章中，荧
光素的浓度是150mg/kg。20克的小鼠需要3毫克的荧光素。常用方
法是腹腔注射，这种方法扩散较慢、开始发光慢、持续发光长。
若进行荧光素静脉注射，这种方法扩散快、开始发光快，但发光
持续时间很短。
2.有几种常用的荧光素酶？特性如何？
常用的有两种荧光素酶，Luciferase和Renilla荧光素酶，二者的
底物不一样，前者的底物是D-luciferin，后者的底物是
coelentarizine。二者的发光颜色不一样，前者所
发的光波长在540-600nm，后者所发的光波长在460-540nm左
右。前者所发的光更容易透过组织，后者在体内的代谢比前者快。大
部分的发表文章通常使用前者用作报告基因，也有一些文章使用两者
进行双标记。
3.能标记病毒吗？能标记病毒的某一个基因吗？
可以标记病毒，由于病毒在核酸结构上的特性，每个病毒标记的
方法不一样，具体的可以参见有关文献。还没有看到标记病毒某一个
基因的报道，但理论上讲，将荧光素酶基因与想标记的基因平行表达，
可以标记任何基因。交通大学的专家已经标记了腺病毒、腺相关病毒
进行了基因治疗方面的活体成像实验。
4.细菌标记问题
小动物活体成像常见问题及分析--第1页
小动物活体成像常见问题及分析--第2页
对于细菌标记，一般利用发光酶基因操纵子luxABCDE控制的编
码荧光素酶的基因和编码荧光素酶底物合成酶的基因组成。利用这种
办法进行标记的细菌会持续发光，不需要外源性底物。但是一般细菌
标记需要转座子的帮助把外源基因插入到细菌染色体内稳定表达。
5.荧光素酶的发光特性如何？
荧光素腹腔注射老鼠后约一分钟后表达荧光素酶的细胞开始发光，
十分钟后强度达到稳定的最高点。在最高点持续约20-30分钟后开始
衰减，约三小时后荧光素排除，发
光全部消失。最好的检测时间是在注射后15到35分钟之间。
6.对于转基因小鼠来说，荧光素酶与标记基因的平行表达情况如
何？
对我们已经标记好的商品化出售的转基因小鼠来说，每一种小鼠
都按照我们预先设定的标准进行严格的表达筛选，而且这种筛选是在
不同代之间连续进行，以保证该基因
在表达和遗传上的稳定性。
7.标记好的细胞的荧光素酶是随机还是插入固定的位点？
插入的位点是随机的，但每一个构建好的细胞株我们都做过详细
的分析，与其母细胞株进行详细的比较，证明荧光素酶的插入对细胞
的各种特性(包括生长周期,成瘤性等)
没有造成影响。
文档评论（0）