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《蛋白质与酶工程》课程笔记

第一章酶工程概论

一、酶工程发展概况

1.酶的发现与早期研究

-1833年，法国科学家贝塞林观察到胃液可以消化肉块，首次提出“酶”的概念。

-1857年，德国化学家毕希纳发现酵母细胞提取物可以发酵糖液，提出了“酶”是生物催化剂的观点。

-1897年，德国科学家艾米尔·费歇尔提出酶的“锁钥模型”，解释了酶与底物的专一性结合。

-20世纪初，科学家们开始研究酶的化学本质，确认酶是蛋白质。

2.酶工程的形成与发展

-20世纪50年代，科学家们发展了酶的提取、分离和纯化技术，使得酶的研究和应用进入新阶段。

-1961年，科学家纳塔和希尔发明了固定化酶技术，使得酶能够在工业上重复使用。

-70年代，随着生物技术的进步，酶的基因克隆和表达技术得到发展，酶的产量和稳定性得到提升。

-80年代，蛋白质工程技术的出现，使得科学家能够根据需求设计和改造酶。

-90年代至今，酶工程在医药、食品、化工、环保等领域得到广泛应用，成为生物技术的重要组成部分。

二、酶催化作用的特征

1.高效性

-酶的催化效率比无机催化剂高107至1013倍。

-酶能够显著降低化学反应的活化能。

2.专一性

-酶对其底物具有高度的选择性，即一种酶通常只催化一种或一类化学反应。

-酶的专一性主要由其活性中心的特定三维结构决定。

3.可调节性

-酶的活性可以通过多种因素进行调节，如激素、反馈抑制、酶的变构效应等。

4.反应条件温和

-酶催化反应一般在生物体内的温和条件下进行，如温度为37°C，pH接近中性。

5.易于失活

-酶在高温、极端pH、强酸碱、重金属离子等条件下容易失去活性。

三、影响酶催化作用的因素

1.温度

-每种酶都有其最适温度，在此温度下酶活性最高。

-温度过高会导致酶的变性失活，温度过低则酶活性降低。

2.pH

-酶的活性受pH影响，每种酶都有其最适pH范围。

-pH过高或过低都会影响酶的活性中心电荷状态，进而影响酶活性。

3.底物浓度

-在一定范围内，酶活性随底物浓度增加而增强，但达到一定浓度后，酶活性不再增加，这是因为酶的活性中心已全部被底物占据。

4.抑制剂

-竞争性抑制剂：与底物竞争酶的活性中心。

-非竞争性抑制剂：与酶的非活性中心结合，改变酶的构象。

-反竞争性抑制剂：与酶-底物复合物结合。

5.激活剂

-激活剂可以增强酶的活性，如某些离子、小分子化合物等。

四、蛋白类酶的分类和命名

1.分类

-氧化还原酶：催化氧化还原反应。

-转移酶：催化基团转移。

-水解酶：催化水解反应。

-裂合酶：催化底物断裂和形成。

-异构酶：催化异构化反应。

-连接酶：催化两个分子连接。

2.命名

-酶的名称通常由底物名称和反应类型组成，例如“醇脱氢酶”表示该酶催化醇的脱氢反应。

五、核酸类酶的分类和命名

1.分类

-RNA酶：催化RNA的切割、加工和修饰。

-DNA酶：催化DNA的切割、修复和重组。

2.命名

-核酸类酶的命名通常包含“核酸酶”字样，并指明其作用的具体类型，例如“RNA聚合酶”表示该酶催化RNA的合成。

第二章酶的生产

一、酶生物合成的调控

1.酶生物合成的遗传调控

-基因转录调控：酶的合成首先受到基因转录水平的调控。转录调控元件如启动子、操纵基因和调控蛋白等，可以影响RNA聚合酶与DNA的结合，从而调控酶的合成。

-转录后调控：mRNA的稳定性、剪接和转运等过程也会影响酶的合成。

-翻译调控：翻译起始、延伸和终止过程中的调控，如翻译激活因子和抑制因子的作用，以及稀有密码子的使用等，都是调控酶生物合成的重要机制。

2.酶生物合成的代谢调控

-反馈抑制：代谢途径的终产物作为抑制剂，通过反馈机制抑制途径中的关键酶，从而调控酶的合成。

-诱导：某些小分子物质可以作为诱导剂，通过与特定的调控蛋白结合，激活酶的合成途径。

-阻遏：某些小分子物质可以作为辅阻遏剂，与阻遏蛋白结合形成复合物，从而抑制酶的合成。

二、微生物产酶的四大模式及其特点

1.连续合成模式

-特点：酶的合成在微生物的整个生长周期中持续进行，不依赖于特定的环境信号。

-例子：一些基本的代谢酶，如糖酵解途径中的酶。

2.稳态合成模式

-特点：酶的合成速率与微生物的生长速率保持一致，通常在指数生长期达到最高。

-例子：一些参与细胞分裂和DNA复制的酶。

3.诱导合成模式