新药的方法学考察.pdfVIP

3.方法学考察

新药可以引用药典或文献收载的与其相同成分的测定方法，但因品种不

同，与自行建立新方法一样.均要进行方法学考察研究。一般考察项目如下：

（1）提取条件的选定优选提取条件对测定结果有直接影响、特别对于制剂

中含有药材原粉的，即由组织细胞中提出有关成分，提取方法的选择尤为关

键，常见的提取方法有冷浸、热浸回流、索氏提取器提取、超声波提取等，滤

除残渣即得提取液。对提取液的取舍一般有两种方法，一种为取全量，即充分

洗净残渣，并将洗涤液合并于提取液中；另一种为取一定量，即在提取前精密

加入定量溶剂，称重，提取后.再补充提取过程损失的溶剂，摇匀，过滤，精密

吸取-定量的提取液.进行含量测定，最后结果按相当的样品量计算，即得。

提取条件的确定，一般要有不同溶剂、不同提取方式、不同时间以及不同

温度、PH值等条件比较而定，可参考文献，重点对比某种条件.也可用正交试验

全面优选条件，再配合回收率试验或与经典方法比较，从而估计方法的可靠

性。

（2）分离纯化根据被测成分的性质，采用一定方法，排除干扰物质，使供

试样品达到一定纯净度。特别是气相、液相色谱分析更应注意此点，以提高分

析准确性并可保护色谱柱。

（3）测定条件的选择如比色法、高效液相、薄层扫描法中最大吸收波长的

选择，液相色谱法中固定相、流动相、内标物的选择，薄层扫描法层析与扫描

条件的选择等。

（4）空白试验在色谱法中常用阴阳对照法，即以被测成分或药材与除去该

成分或该药材的成药作对照，可考察被测成分的斑点（或峰）位置是否与干扰

组分重迭，以确证测定指标（如吸收度、蜂面积）是否仅为被测成分的响应，

防止假阳性的误判。紫外分光光度法或比色法中的空白对照液常见的有溶剂空

白、试剂空白（溶剂加显色剂），对复方制剂也须同色谱法做阴性对照.确证吸

收度仅为被测成分的响应。对单一成分或大类成分测定，均须做此试验。

（5）样品浓度与响应值样品浓度与吸收度或色谱峰面积（或峰高）之间的

线性关系考察、即标准曲线的制备。

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紫外分光光度法或比色法须制备标准曲线，用以确定取样量并计算含量。

色谱法一般均采用对照品比较法如外标法或内标法测定，但也必须进行线性考

察，目的有三：

a.确定样品浓度与峰面积或峰高是否呈线性关系；b.确定线性范围，即适用

的样品点样或进样量的确定；c.直线是否通过原点，以确定是以一种或二种对照

品量（即一点法或二点法）测定并计算。

标准曲线相关系数应在0.999以上，薄层扫描法可在0.995以上。

（6）测定方法的稳定性实验此项考察目的是选定最佳的测定时间范围。用

紫外分光光度法、比色法或薄层扫描法等测定时，应对被测液或薄层色谱斑点

的吸收度值稳定性进行考察，即每隔一定时间测定一次，延续3-4小时，视其

是否稳定，以确定适当的测定时间。

（7）精密度试验如气相、液相色谱法对同一供试液多次进样测定，簿层扫

描法对同一薄层板及异板多个同量斑点扫描测定，可考察其精密度，对同一薄

层斑点连续进行多次测定，则可考察仪器精密度。

（8）重复性试验按拟定的含量测定方法，对同一批样品进行多次测定（平

行试验至少5次以上，即n5），计算相对标准偏差（RSD），一般要求低于

5%。同一人测定多次称重复性，不同人或实验室测定称再现性。

（9）检测灵敏度及检测下限的测定，分析方法的灵敏度一般以工作曲线的

斜率表示。

其值越大.方法的灵敏度就越高。色谱法的灵敏度可以用峰高（mm）/对照

品量（mg）表示。

最小检出量即检测下限，一般按经验法设计数个不同进样量，以目测估计

最小俭出量。有时常把最小检出量理解为灵敏度，实际上两者概念不同。

（10）回收率试验含测方法的建立，多以回收率估计分析的误差和操作过

程的损失，以评价方法的可靠性。回收率实验设计也有多种，在中成药分析中

常见的有以下几种；

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①加样回收，即于已知被测成分含量的成药中再精密加入一定量的被测成

分纯品，依法测定。用实测值与原样品中含测成分之差，除以加入纯品量计算

回收率。此法不用制备空白对照，模拟真实性好。对单味药材的回收率测定，

因不易制备除去被测成分的药