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基质细胞衍生因子_SDF_1_的新受体CXCR7对内皮祖细胞调节作用的初探_(4)--第1页
2大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养及鉴定
2.1引言
内皮祖细胞是具有高度增殖潜能，在体内具有促血管生成及内皮修复作用。
虽然EPCs存在于许多组织中，如骨髓、心肌组织、脂肪组织、肝脏、脐带血、骨
骼肌等，但是目前认为EPCs主要来源于骨髓。大量研究证明，在某些生理和病理
条件的刺激下，骨髓中的EPCs可被释放动员进入到外周血循环，参与到血管生成
部位，因此，EPCs在缺血组织再血管化和损伤组织血管修复中扮演着重要的角色
[43]
。目前对骨髓源EPCs研究中，人们将同时具有CD34,VEGFR-2，CD133三种
表面特异性抗原标志的细胞称为早期的功能性血管EPCs[40]。（见图2）CD34是造
血干细胞的重要标志,在胚胎早期血管也有表达,因而作为识别EPCs的标志之一；
VEGFR-2作为最早出现的血管系统细胞标志,是胚胎期血液血管发生的关键受体；
CD133为120kD的跨膜多肽,选择性的表达于早期造血细胞和胚胎肝、骨髓以及外
++
周血的祖细胞,但在成熟内皮细胞中不表达。而循环EPCs的标志为CD34、CD31、
VEGFR-2+、VE-cadherin+，很明显已失去了CD133，并开始表达vWF。除了EPCs
外，循环血液中也有更多的成熟内皮细胞（CECs），其数量在不同的病理状态下发
生变化。EPCs从骨髓释放到外周血循环受到大量细胞因子的调控。因此，EPCs没
有统一的标准的表面标记，不同来源的EPCs具有不同的表面标记，或者可能在不
同发育阶段表达不同的表面标记。
7
基质细胞衍生因子_SDF_1_的新受体CXCR7对内皮祖细胞调节作用的初探_(4)--第1页
基质细胞衍生因子_SDF_1_的新受体CXCR7对内皮祖细胞调节作用的初探_(4)--第2页
图2.1循环EPCs主要来源
Fig2.1ThemainsourceofcirculatingEPCs
循环EPCs主要来源于骨髓，另外，脑、肝脏、心脏和脂肪组织也发现存在血
管祖细胞，这说明EPCs来源于不同的器官或者组织，并参与再内皮化和血管发生
[41]+CD34-
。也有文献报道CD14除了分化为熟内皮细胞外，还可以分化为造骨细胞、
神经细胞和脂肪细胞[42]。
本部分将对SD大鼠的胫骨中骨髓单个核细胞进行淋巴液密度梯度分离，并采
用加入EBM-2培养液+SingleQuots添加剂生长因子培养，选用CD144/VE-cadherin
和CD31/PECAM-1进行表型鉴定，FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL进行功能鉴定，从
[43]
而来证明骨髓中存在功能性EPCs。
2.2材料与方法
2.2.1实验动物材料
成年健康SD(Sprague-Dawley)大鼠，雄性，清洁级，体重(150±30)g，由重庆
市第三军医大学实验动物中心提供。
2.2.2细胞培养与诱导的主要试剂
Dulbecco’smodifiedEagle’smedium(lowglucose)Hycl
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