《生物制品中DNase残留检测－核酸荧光底物法》征求意见稿 编制说明.pdf

《生物制品中DNase残留检测－核酸荧光底物法》

征求意见稿编制说明

一、工作简况

（一）任务来源

按照《中国食品药品企业质量安全促进会团体标准管理办法（试行）》的有

关规定和要求，由国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量监测与评价重点实验

室、武汉瀚海新酶生物科技有限公司提出《生物制品中DNase残留检测－核酸

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荧光底物法》立项申请，中国食品药品企业质量安全促进会于年月组织

专家按程序审议后予以立项。

（二）目的、意义及必要性

DNase

脱氧核糖核酸酶（）是一种可以将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断从而

降解DNA分子的水解酶。DNase普遍存在于环境和许多生物材料中，且具有极

强的活性，微量的DNase污染可以造成大量DNA的降解，对实验和生产工艺造

成显著影响。

DNA药物及质粒等生物制品生产过程中，也存在大量DNase的残留和污染

的可能性，包括生物样品中含有的内源性DNase，存在于环境中的水，缓冲液，

耗材表面以及环境微生物和人等外源性DNase。残留DNase作为杂质，如果跟

随药物或生物制品进入人体内，有可能引发高强度的免疫原性等反应，引起较严

重的安全性风险。因此需要对生物制品的外来物料、耗材和环境等的DNase残

留进行准确分析检测，使之控制在安全范围内。

《中华人民共和国药典2020年版》中就《人用疫苗总论》《人用重组单克

隆抗体制品总论》《人用基因治疗制品总论》及《细胞治疗产品研究与评价技术

指导原则》均提到了在该类型生物制品的研发及生产过程中需要对工艺杂质中包

含DNase的残留进行控制；此外，欧洲药品监督管理局表明基因治疗产品方面

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应制定检验方法，并设定上限，以检测细胞来源污染物的残留水平。然而目前国删除叶宇翔4

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内外暂没有通用标准中明确规定疫苗和生物制品中核酸酶残留量上限及其对应

的检测方法。

核酸水解凝胶电泳法和紫外分光光度计法常被用于检测DNase的残留，然

而核酸水解凝胶电泳法受实验人员的主观判断影响较大，无法准确定量，且操作

时间长，测定通量较低；核酸水解紫外分光光度法定量限仅为0.01U/μL，不适

合微量核酸酶残留的活性检测；高效液相色谱法和电化学法则受限于仪器设备。

相比之下，核酸荧光底物法灵敏度高、检测速度快且能实现核酸酶活性的定量检

测，该方法在海外已用于检测分子生物学环境及试剂中核酸酶残留量，如日本

WAKO公司分子级别的无核酸酶化学品采用该方法作为质量认证的标准之一，

德国Sartorius也将该方法作为无核酸酶耗材的质量认证标准。2023年4月，为

进一步提升《中国药典》生物制品标准的科学性，更好地保障生物制品质量，国

家药典委员会设立了核酸酶残留量检测方法研究的课题，并在《关于征求核酸酶

残留量检测方法验证意见的函》中提出了核酸酶残留量测定法（核酸荧光底物法）

的草案。

（三）团体标准起草单位和主要起草人

本标准起草单位：武汉瀚海新酶生物科技有限公司、国家药品监督管理局疫

苗及生物制品质量监测与评价重点实验室、中生复诺健生物科技（上海）有限公

司、江苏申基生物科技有限公司、苏州艾博生物科技有限公司、北京引正基因科

技有限公司、深圳市晋百慧生物有限公司、惠正奇医药（广州）有限公司、广州

正达医药科技有限公司、百奥泰生物制药股份有限公司、深圳深信生物科技有限

公司。

本标准主要起草人：杨广宇、耿玉杰、李梁、严壮、陆家海、叶宇翔、武飞

飞、竺添、沈明云、顾文艺、于磊、黄贤明、梅雄、李文华。

（四）主要工作

起草阶段：

（1）2024年4月19日，完成《生物制品中DNase残留检测－核酸荧光底