4个香菇品种的AFLP分子标记研究.docx

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4个香菇品种的AFLP分子标记研究

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雷萍张文隽吴亚召王磊赵玉鹏任宏飞

摘要??试验以香菇LB-21、香菇L808、香菇215和香菇B15-1等4个品种为研究材料，采用AFLP分子标记技术分析其遗传多样性。结果表明，4个香菇品种之间的遗传相似性系数变化范围为0.6695～0.8787;UPGMA法聚类分析发现，4个品种分为2组，香菇LB-21与香菇B15-1亲缘关系较近，遗传相似性系数为0.8745，香菇L808与香菇215亲缘关系较近，遗传相似性系数为0.8787。

关键词??香菇;AFLP分子标记;遗传多样性;聚类分析

??S646.12??????A??????1007-5739（2019）09-0047-02

Abstract??ThegeneticdiversityofLB-21，L808，215andB15-1LentinusedodesvarietieswasanalyzedbyAFLPmolecularmarker.TheresultsshowedthatthevariationrangeofgeneticsimilaritycoefficientamongthefourLentinusedodesvarietieswas0.6695-0.8787.UPGMAclusteringanalysisshowedthatthefourvarietiesweredividedintotwogroups，LB-21andB15-1werecloselyrelated，andthegeneticsimilaritycoefficientwas0.8745.L808and215werecloselyrelated，andthegeneticsimilaritycoefficientwas0.8787.

Keywords??Lentinusedode;AFLPmolecularmarker;geneticdiversity;clusteringanalysis

香菇（Lentinusedodes（Berk.）sing）又名香蕈、冬菇、花菇、椎茸等，在分类学上隶属于担子亚门层菌纲伞菌目侧耳科香菇属[1]。其味道鲜美，营养丰富，药用价值较高，是世界第二大食用菌，也是世界真菌学家研究的热点。我国香菇栽培历史悠久，栽培面积逐年增加，菌种选育和栽培技术研究等工作受到了科研工作者的重视。香菇菌种是香菇产业化发展的重要基础，决定了其产量和质量。从分子生物学水平鉴定菌种和构建DNA指纹图谱有助于准确识别菌种，从而有效地利用不同香菇品种的优势，促进香菇生产的发展[2]。

目前，应用于香菇种质资源研究的分子标记主要有SSR、AFLP、RAPD、SCAR、SRAP[3-7]。AFLP分子标记技术具有模板量少、引物通用性高、多态检出率高、稳定性和重復性较强等优点，广泛应用于植物分子遗传图谱构建、遗传多样性及亲缘关系研究、基因定位和分子标记辅助育种等研究领域[8-9]。本试验利用AFLP分子标记技术分析不同香菇品种的遗传多样性，从基因水平反应品种之间的关系，为进一步开展香菇生物学研究提供一定的试验依据。

1??材料与方法

1.1??试验材料

供试香菇品种共4个，即香菇LB-21、香菇L808、香菇215和香菇B15-1，均来自陕西省微生物研究所微生物菌种资源中心第三研究室。香菇LB-21是选育品种，抗霉菌能力强、产量高，经小面积栽培产量稳定;香菇L808是广温型品种，菇体中等偏大、菇形圆整、菇柄较短、菇质优、菌龄短，产量高;香菇215是中高温型品种，菌肉厚实，菌柄中长偏短，抗逆性强，产量高;香菇B15-1是野生香菇菌株，抗杂菌污染能力强，柄短肉厚。

1.2??主要试剂及引物

主要试剂有Taq酶（2U/μL）、dNTP（10mmol/L）、引物（10mmol/L）（生工基因）、内切酶（10U/μL）（NEB公司）、T4连接酶（5U/μL）（NEB公司）。Marker为DL2000、100bpDNALadder。引物在北京六合华大基因科技有限公司合成。试验所用接头和引物信息见表1，试验所用引物组合见表2。

1.3??试验方法

1.3.1??样品DNA提取。采用改良CTAB法进行DNA提取，用2.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

1.3.2??限制性内切及连接。对所选样品采用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切，酶切与连接反应同步进行。酶切与连接体系（20μL）为：10×AFLPdigest-l