鳜和斑鳜金属硫蛋白-2基因的克隆及表达分析.pdfVIP

鳜和斑鳜金属硫蛋白-2基因的克隆及表达分析

引言

金属硫蛋白(MT)是一类高度保存的低分子量蛋白，在各种生物体中

广泛存在，并在多种物理和生物过程中起着重要作用。它们的结构和功

能是由多个金属离子修饰的半胱氨酸残基所决定的。鳜和斑鳜是常见的

淡水鱼类，具有重要的经济和营养价值，在水产养殖中具有广泛的应用。

本文旨在克隆、表达和分析鳜和斑鳜金属硫蛋白-2基因。

材料与方法

鳜和斑鳜的组织样本采集自湖南省常德市一家水产养殖场，分别采

集肝脏、心脏、鳃和肌肉等组织。通过反转录PCR(RT-PCR)技术，将样

本提取出的总RNA逆转录成cDNA，并用PCR扩增鳜和斑鳜MT-2基因。

PCR产物采用T/A克隆到pGEM-TEasy载体中，并进行测序验证。

将鳜和斑鳜MT-2基因插入到原核表达向量pET-28a(+)中，将重组

质粒进行转化和筛选后，得到在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的融合蛋白。

采用Ni-NTA亲和层析分离纯化蛋白，并进行钴原子吸收光谱及印迹分析，

以确定金属离子的含量和蛋白质的表达情况。

结果

鳜和斑鳜MT-2基因的序列分别为410bp和403bp长。序列分析

显示，两种鱼类的MT-2基因