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补肾方剂对绝经后骨质疏松症大鼠的影响及其作用机制的研究
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【摘要】目的：探究补肾方剂对绝经后骨质疏松症大鼠的影响及其作用机制。方法：卵巢切除术构建绝经后骨质疏松症大鼠模型，随机分为假手术组、模型组、金匮肾气丸组、六味地黄丸组、阿仑膦酸钠片组，针对性处理后检测各组大鼠股骨骨密度、血清雌二醇表达水平、成骨细胞活性、成骨细胞功能、雌激素受体表达水平并分析。结果：模型组骨密度与血清雌二醇表达水平低于假手术组（P＜0.05）；金匮肾气丸组、六味地黄丸组、阿仑膦酸钠片组骨密度与血清雌二醇表达水平均高于模型组（P＜0.05）；高剂量六味地黄丸组、中高剂量金匮肾气丸组骨细胞活性、ALP表达水平高于假手术组（P＜0.05）；金匮肾气丸组ERαmRNA表达水平高于假手术组（P＜0.055）。结论：补肾方剂可有效治疗绝经后骨质疏松症，金匮肾气丸整体效果较六味地黄丸好。
【关键词】补肾方剂；骨质疏松症；金匮肾气丸；绝经
绝经后骨质疏松症是临床常见疾病，也是造成绝经女性骨折的重要原因。临床治疗以骨吸收抑制、骨形成促进为主，但临床所用西药副作用大，长时间使用费用高，综合效果并不理想。文献资料表示，中医药治疗是安全且可靠治疗方法，在患者症状缓解、病情改善、健康维护上存在积极影响[1]。本研究采用动物实验研究法就补肾方剂应用效果与作用机制进行了探究，旨在优化绝经后骨质疏松症中医药治疗方案。
1材料与方法
1.1材料
动物：南京君科生物工程有限公司提供健康SD雌性大鼠，SPF级，体质量（360±40）g。
仪器、药品与试剂：GELunarDPXProdigy双能X射线骨密度仪；湖南迈克尔实验仪器有限公司提供超高速冷冻离心机；北京同仁堂科技发展股份有限公司提供的金匮肾气丸、六味地黄丸；海南全星制药有限公司提供阿仑膦酸钠片；上海派森诺生物科技股份有限公司提供雌激素酶联免疫分析试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒等。
1.2方法
100只健康大鼠，80只大鼠利用卵巢切除术构建绝经后骨质疏松症大鼠模型纳入去卵巢组，20只大鼠（不切除卵巢）纳入假手术组；术后肌注20万U青霉素，5d；术后42d从2组大鼠中各取2只进行绝经后骨质疏松症大鼠模型建立确定；将成模大鼠分为模型组（灌胃生理盐水）、金匮肾气丸组（灌胃金匮肾气丸）、六味地黄丸组（灌胃六味地黄丸）、阿仑膦酸钠片（灌胃阿仑膦酸钠片）组，各18只。假手术组灌胃生理盐水。
1.3观察指标
大鼠股骨骨密度、血清雌二醇表达水平、成骨细胞活性、成骨细胞功能、雌激素受体表达水平[2]。
1.4统计学方法
用SPSS26.0软件进行统计学分析，计量资料用（均数±标准差s）表示，用t检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1绝经后骨质疏松症大鼠模型评价
2组骨密度、血清雌二醇表达水平差异较大，P＜0.05；相对于假手术组去卵巢组大鼠骨小梁较为薄弱，但无骨小梁断裂、骨小梁扭曲表现，脂肪细胞较多骨髓细胞较少，说明绝经后骨质疏松症大鼠模型建造成功。
表1术后3个月骨密度与血清雌二醇水平比较（±s）
组别
n
骨密度（g/cm2）
血清雌二醇（pmol/L）
去卵巢组
18
0.30±0.03
17.16±8.22
假手术组
18
0.38±0.02
60.36±5.25
t
9.414
18.781
P
0.000
0.000
2.2补肾方剂对去卵巢组大鼠骨密度与血清雌二醇的影响
模型大鼠经不同药物处理骨密度、血清雌二醇水平有所改善，金匮肾气丸组最高，其次是阿仑膦酸钠片，最后是六味地黄丸组，见表2。
表2补肾方剂对去卵巢组大鼠骨密度与血清雌二醇的影响（±s）
组别
n
骨密度（g/cm2）
血清雌二醇（pmol/L）
模型组
18
0.30±0.03
17.16±8.22
金匮肾气丸组
18
0.34±0.02*
45.06±7.63*
六味地黄丸组
18
0.32±0.02*@
28.95±8.17*@
阿仑膦酸钠片组
18
0.33±0.02*
40.22±9.21*
注：与模型组比较，*P＜0.05；与金匮肾气丸组比较，@P＜0.05；与六味地黄丸组比较，P＜0.05。
2.3不同浓度补肾方剂对成骨细胞活性与功能的影响
高剂量六味地黄丸与中高剂量金匮肾气丸组成骨细胞活性与功能存在较高，48h条件下成骨细胞活性、ALP表达水平与假手术组差异较大（P＜0.05），见表1。
表3不同浓度补肾方剂对成骨细胞活性的影响（±s）
组别
n
24h
48h
ALP（ng/g）
假手术组
6
1.01±0.01
1.02±0.02
1.01±0.01
低剂量六味地黄丸组
6
1.02±0.04
1.05±0.06
1.02±0.02
中剂量六
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