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葛根素的提取方法
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【】R932【】A【】1672-5085(2009)34-0258-01
葛根素具有良好的药用、保健作用。目前，许多研究人员、研究机构都在探求高效、简便的提取葛根素的方法。在此，我将对葛根素的提取方法作一总结。
1葛根总黄酮的提取及纯化
野葛根中除含有异黄酮化合物外还含有15％－19％的淀粉，在提取总黄酮时，淀粉为主要杂质，影响葛根黄酮的含量。
最早，柴田承二等提取葛根黄酮的方法是采用甲醇进行热回流提取，以醋酸铅沉淀法处理。
Jun-eiKinjo等采用甲醇热回流提取，水饱和正丁醇萃取法精制葛根总黄酮。
张尊听等用甲醇冷浸法从野葛根中提取葛根总黄酮。
郭建平等比较了以甲醇、95％乙醇、70％乙醇为溶剂，采用冷浸法、热回流法、铅盐沉淀法、甲醇冷浸水饱和正丁醇萃取法、甲醇冷浸－水饱和正丁醇萃取－硅胶柱层析法从葛根中提取纯化总黄酮。认为冷浸法、回流法较铅盐沉淀法收得率高且操作简便，冷浸法又较回流法简便，收得率高。
本人认为，甲醇有毒，操作时要注意，乙醇比甲醇更适合作为葛根素总黄酮的提取剂。
李剑君等比较了水、乙醇作为溶剂和铅盐沉淀法从葛根中提取总黄酮，提出了以乙醇溶液为溶剂进行逆流萃取的工艺路线，并且采用正交试验法确定出最佳的乙醇浓度、温度和时间。
现在很多研究人员都在用正交法分析提取葛根素的最佳条件，主要是寻求从葛根提取总黄酮这一步中乙醇浓度（％）、溶剂量（倍）、提取时间（h）和提取次数（次）的最佳组合。每个实验室所测得的最佳提取条件不尽相同，本人认为所谓的最佳条件并不是绝对的。在大批量提取葛根中葛根素的生产过程中，还要综合考虑多方面的因素，以求成本最低，收益最大。
2从提取液中分离出葛根素并纯化
从葛根获得的提取液仍是混合物，有葛根素的衍生物、大豆苷元的衍生物，还有杂质等。需要进一步从中分离纯化葛根素。
2.1酸水解法
张尊听等以盐酸水解总提物，使其中的葛根素衍生物、大豆苷元衍生物转化成葛根素和大豆苷元，在这酸性溶液中，葛根素和大豆苷元以盐的形式存在，葛根总黄酮中的其他酸性成分和脂溶性成分以沉淀的形式存在，过滤可以除去。滤液用二等分的氯仿萃取两次，氯仿萃取的酸水解液加水稀释1倍，放置4d可析出葛根素粗品，将其用HAc-CH3OH(1:1)重结晶两次，得葛根素产品。该试验发现选择水解的盐酸浓度最大为8％，每1g提取物加3ml盐酸溶液葛根素的收得率最高。
2.2反复萃取、结晶
郭延生等将乙醇浸取野葛根得浸取液浓缩成浸膏状，用正丁醇溶解浸膏，将其溶解液用水萃取，水萃取液再在正丁醇中反复萃取，正丁醇萃取液经三氧化二铝柱脱色、减压浓缩、抽滤、干燥、溶解、结晶得葛根素精品。以薄层层析色谱上葛根素荧光成分的消失作为提取的终点。
2.3吸附法
向纪明等运用吸附法分离葛根素。将粗提物用水溶解后，滤去不溶物，上处理好的吸附剂，经吸附饱和后，水液弃去，用蒸馏水洗去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，至水清，改用70％乙醇洗脱，浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至比重d=1.2时加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，固体再用适当溶剂反复重结晶，烘干，得葛根素精品。并且，向纪明等用正交实验法找出了用吸附法分离葛根素的影响因素依次是吸附剂的选择、洗脱剂乙醇的浓度、洗脱剂的用量及吸附剂的用量。实验发现D101大孔吸附树脂用于葛根素的精制，不仅吸附量较好，而且洗脱和再生容易，可反复使用。综合考虑成本等主要因素的影响，选出最佳方案，即用相对于粗提浸膏7倍量的D101大孔树脂吸附，用12倍量的70％乙醇水溶液作洗脱剂，葛根素的提取率可达90％以上。
3葛根素含量的测定方法
3.1TLC(薄层扫描法)
郭建平等用薄层扫描法测定葛根提取物及制剂中葛根素的含量。张尊听也在实验中运用了薄层扫描法。葛根素的薄层扫描包括以下几步：
（1）所需测量的样品的薄层色谱。
（2）葛根素标准曲线的绘制。
（3）样品中葛根素含量的测定。
3.2HPLC(高效液相色谱法)
许多研究人员以HPLC为测定方法，测定葛根素的含量，以评价提取、分离、纯化葛根素的方法。
3.3RT-HPLC(反相高效液相色谱法)。
4制备的葛根素单体的鉴定与分析
4.1定性鉴定
白色粒状、红外光谱与葛根素标准图对照。
4.2定量分析
采用紫外—分光光度计，以葛根素为标准样品，对产品进行定量分析，葛根素在250nm波长处测定吸光度，可得产品的纯度。
以上是对葛根素提取、分离、纯化方法的总结。葛根素单体的制备方法在不断地改进，所得的产品的纯度在逐步提高。以后还会有更好的方法用于单体的制备，以更加简单、安全、高效的工艺生产出高纯度的单体。如今，在全球“绿色”浪潮的影响下，植物药物等天然药物被广泛重视，我们要抓住这个机遇，强化现代植物药意识，大力开发我国的传统医药。
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