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基于DPPH法的茶叶儿茶素类抗氧化谱效关系研究

作者：林清霞王丽丽杨军国宋振硕陈林

来源：《福建农业学报》2020年第02期

????????摘要：[目的]研究茶葉儿茶素HPLC指纹图谱与其自由基清除活性的关系。[方法]采用70%甲醇对绿茶、白茶、闽北乌龙、闽南乌龙、红茶5类共25批次样本进行提取;以福林酚法测定总酚含量;以1.1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法研究自由基清除活性;同时通过高效液相色谱法（HPLC）获取指纹图谱数据并对所获取的指纹图谱数据进行主成分分析;采用偏最小二乘回归分析研究HPLC指纹图谱与DPPH清除活性的谱效关系，结合皮尔逊（Pearson）相关性分析对偏最小二乘回归模型进行验证。[结果]获取25批次样本的HPLC指纹图谱，确定了8个儿茶素类化合物，成功构建了偏最小二乘回归方程，其决定系数R2=0.9009.结果表明表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）与DPPH清除力相关性最强，均呈极显著正相关;没食子酸（GA）与DPPH清除力呈负相关。Pearson相关性分析结果与偏最小二乘回归模型结果基本一致。[结论]本研究通过HPLC指纹图谱信息可预测抗氧化活性。

????????关键词：儿茶素;抗氧化;高效液相色谱（HPLC）;谱效关系

????????中图分类号：TS272文献标志码：A文章编号：1008-0384（2020）02-4210-07

????????0引言

????????（研究意义）谱效关系是中医药研究人员提出的一种全新的思维方式，即采用高效液相色谱（Highperformanceuquidchromatography，

????????HPLC）、近红外光谱（Nearinfraredspectrometry，NIR）、核磁共振（Nuclearmagneticresonance，NMR）、气质/液质联用（Gaschromatography/Liquidchromatography-Massspectrometry，GC/LC-MS）等先进分析技术获得样品的化学指纹图谱，也就是“谱”：同时采用传统分析方法获得这些样品的活性数据，也就是“效”：将所得到的两组数据通过合适的化学计量学和统计学方法进行数据挖掘和处理，从而建立指纹图谱与药效之间的关系模型。通过模型即可预测药效大小，实现高通量分析，极大提高分析速度，缩短分析时间。（前人研究进展）谱效方法的提出为中药研究解决了许多难题，中药成分复杂，其药效是多种成分共同作用的结果，通过谱效关系研究可以阐明具有协同作用或拮抗作用的有效成分组成，从而揭示药效物质基础。徐晶晶等通过谱效关系研究，筛选出薄荷药材中发挥抗氧化活性的化学成分群，为合理确定中药药效物质基础起到了积极作用。中药药效基础为多成分共同作用，而每个成分对药效贡献度不一致。Zhu等通过谱效关系研究，确定了各化合物的活性贡献度的大小顺序，从而阐明了有效成分的组成、数目和对集体的作用程度。Xu等指出，谱效关系的研究能够反映中药内在质量的效果指纹，可以通过化学指纹图谱来评估中药质量。（本研究切入点）茶叶与中药类似，内含成分复杂，其抗氧化活性亦是多成分共同作用的结果，传统的茶叶抗氧化活性检测方法，如1，1-二苯基-2-三硝基苯肼[1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradical2，2-D真phenyl-1-（2，4，6-trinitrophenyl）hydrazyl，DPPH]、2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐[2，2-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid），ABTS]、铁离子还原航氧化力测定法（Ferricreducinz/antioxidantpowerassay，FRAP）等只能检测茶叶的总抗氧化能力，无法确定各成分对抗氧化活性的贡献度，只有先经过提取、分离、鉴定后再分别对各成分进行抗氧化活性测定。对单一组分的抗氧化成分进行提取、分离易导致其活性的改变，无法准确评价其抗氧化能力，且传统测定方法耗时费力。茶多酚是茶叶中最主要的抗氧化活性成分，其中儿茶素类约占茶多酚总量的60%～80%。（拟解决的关键问题）本研究采用DPPH法对茶叶的抗氧化活性与其儿茶素类HPLC指纹图谱进行谱效学分析，探讨其图谱特征峰抗氧化活性大小并建立模型，以期通过谱效模型预测茶叶儿茶素的抗氧化活性，实现茶叶抗氧化活性的快速分析。

????????1材料与方法

????????1.1材料与设备

????????供试材料：从市场购得不同类别茶叶样本共计30批次，25批次作为训练集用于建模，具体构成为：5批次绿茶（Gl、G2、G3、