CRISPR-Cas9精细原理：基因敲除、点突变、基因插入.pptVIP

CRISPR-Cas系统简介

CRISPR-Cas系统的应用技术

CRISPR-Cas系统的应用前景;1.CRISPR-Cas系统简介;2、将该序列以及cas9基因连入如图所示载体。

然后在CRISPR基因座的5端合成重复序列；

3CRISPR-CAS系统的作用机理

2007年，Barrangou等首次发现细菌可能利用CRSPR系统抵抗噬菌体入侵；

然后在CRISPR基因座的5端合成重复序列；

CRISPR-Cas系统简介

2CRISPR-Cas9系统的应用前景

1CRISPR-Cas9介导的基因组精确编辑技术

这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。

这种失去ＤＮＡ切割活性的Cas9蛋白被命名为DeadＣas9。;目前应用CRISPR-Cas9系统的研究主要集中在基因编辑方面。

这种失去ＤＮＡ切割活性的Cas9蛋白被命名为DeadＣas9。

目前应用CRISPR-Cas9系统的研究主要集中在基因编辑方面。

1CRISPR-Cas9介导的基因组精确编辑技术

然后在CRISPR基因座的5端合成重复序列；

基因组编辑技术是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。

将ｄCas9与gRNA在细胞中共表达，则gRNA可以介导ｄCas9蛋白与ＤＮＡ结合。

它与folk酶功能类似，但是它并不需要形成二聚体才能发挥作用。

3CRISPR-CAS系统的作用机理

3CRISPR-CAS系统的作用机理

2CRISPR-Cas9系统的应用前景

1、在把基因序列中寻找NGG序列获得其附近20多个碱基的序列，与tracrRNA序列融合，设计出sgRNA并合成该序列。

它与folk酶功能类似，但是它并不需要形成二聚体才能发挥作用。

1、在把基因序列中寻找NGG序列获得其附近20多个碱基的序列，与tracrRNA序列融合，设计出sgRNA并合成该序列。

1987年，日本课题组在K12大肠杆菌的碱性磷酸酶基因附近发现串联间隔重复序列，随后发现其广泛存在于细菌和古细菌的基因组中，2002年，正式将其命名为成簇的规律间隔的短回文重复序列

Mali等人利用来自酿脓链球菌和嗜热链球菌中的CRISPR相关蛋白Cas9，在一段人为重组的sgRNA(small-guideRNA)的引导下，针对小鼠和人类基因组的特定基因片段实现了精确的剪切。

这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA???切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。

目前应用CRISPR-Cas9系统的研究主要集中在基因编辑方面。

1CRISPR-Cas9介导的基因组精确编辑技术

3、转化感受态，质粒小提，测序验证。

2CRISPR-Cas系统的结构

CRISPR/Cas系统活性的发挥或者是对外源遗传物质的干扰

2、CRISPR-Cas系统的应用

2、将该序列以及cas9基因连入如图所示载体。

它与folk酶功能类似，但是它并不需要形成二聚体才能发挥作用。;1.3CRISPR-CAS系统的作用机理;1.3CRISPR-CAS系统的作用机理;2、CRISPR-Cas系统的应用;2.1CRISPR-Cas9介导的基因组精确编辑技术

;例子：基因敲除的实验过程;2.2CRISPR/Cas9介导的转录抑制与转录激活

;2.2CRISPR/Cas9介导的转录抑制与转录激活;3、CRISPR-Cas9技术的优势与前景;3.2CRISPR-Cas9系统的应用前景;