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FVIII抗体检测

二、实验室诊断

（一）初筛试验

凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）正常，活化部分凝血活酶时间（APTT）

延长。

（二）纠正试验（证实有时间依赖性的抑制物存在）

延长的APTT不能被正常混合血浆纠正。多数血友病患者替代治疗后产生抑

制物显示特征性模式，即患者血浆与正常混合血浆按1:1比例混合后的即刻APTT

结果介于两种分别检测的APTT结果之间，但当37℃混合温育1-2小时后检测

APTT，其APTT结果进一步延长。

（三）确诊试验

FⅧ:C减少，且随孵育时间呈进行性下降。

（四）抑制物定量测定（Bethesda方法；Nijmegen改良法）

1.Bethesda法（1975年，Kasper）

（1）试验原理：血友病A患者产生的FⅧ抑制物呈时间依赖性。在含抑制物

的血浆中加入人源或猪源FⅧ，37℃混合温育，随孵育时间延长，FⅧ被抑制物逐

渐中和。如加入FⅧ的量和孵育时间标准化，则可根据FⅧ被中和的量，以Bethesda

单位的方式确定抑制物滴度。

（2）检测方法：将患者血浆与正常混合血浆按一定比例混合，37℃温育2

小时后，测定该混合物中剩余的FⅧ:C水平。1BU的定义：能使血浆中FⅧ:C

降低50%的抑制物活性为1个Bethesda单位（BU）。患者血浆稀释倍数的倒数为

患者血浆抗体滴度的BU值。（图1）

图1.抑制物检测（Bethesda法）

（3）操作步骤

1）将患者血浆用OVB缓冲液按一定比例倍比稀释，一般做多个稀释倍数，样

本一直置于冰上保存。如果之前有关于抑制物检测的相关资料，则可作为参照对

样本进行适当的稀释。

2）将正常混合血浆（FⅧ浓度已经过标准化检测）等量加入每份待测的稀释

血浆样本中，FⅧ浓度通常为100IU/dl。因此，每份混合物的FⅧ起始浓度大约

为50IU/dl。

3）37℃孵育2小时后进行FⅧ:C检测，采用正常混合血浆和乏FⅧ血浆的混合

物作为标准品进行定标，并以该标准曲线来计算其它混合物的FⅧ活性。本检测

中，此混合物的FⅧ:C为100%。

4）根据残余FⅧ与抑制物单位的关系图计算抑制物的浓度。

（4）结果解释：Bethesda试验结果解释见表1。

表1.Bethesda试验的结果解释

滴度（BU/ml）结果解释

＜0.5不显著

0.5~5存在低浓度抑制物：

——可以被过量的FⅧ纠正

——可能是低反应型

＞5存在高浓度抑制物：

——FⅧ不起作用

——免疫记忆反应，产生更多抑制物（高反应型）

2.Nijmegen改良法（NA）

（1）试验原理：在正常混合血浆中加入0.1mol/L、pH7.4咪唑缓冲液。由

于使用了缓冲体系，使反应中pH值更加稳定，提高试验准确性与敏感性，适合

低滴度抗体的检测，受到世界血友病联盟（WorldFederationofHemophilia，

WFH）的推荐。

（2）试验方法：将患者血浆与缓冲后的正常混合血浆于37℃共同温育2小

时，以保证体系pH稳定。以正常混合血浆与乏FⅧ血浆组成的对照混合物（和

患者血浆混合物在同样条件下温育）为标准品制备标准曲线，其余样本按照该标

准曲线检测残余FⅧ水平。采用假定100%残余FⅧ=0BU/ml，50%残余FⅧ=1BU/ml

（国际上认可的抑制物活性转换方式）而建立的残余F