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RNA干扰技术的原理与应用研究

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目的：探究RNA干扰技术的原理与应用。方法：选择AcclaimSEC-300及MAbPacSEC-1色谱柱，直径分别为4.6×300mm、2.1×30mm，流速分别为≤0.35mL/min、0.05～0.075mL/min，柱温分别为

RNA技术在制药产业应用范围较广泛，比如乳腺癌、脑部胶质瘤等恶性肿瘤、以及遗传性疾病等。由于制药涉及的原理及机制比较复杂，类型较多，比如反义寡核苷酸、小干扰RNA等，但由于RNA药物修饰、传递及免疫激活等方面尚未完全研究清楚，因此需进一步研究[1-2]。盐酸小檗碱是一种生物碱，具有抑菌作用，能够有效清除毒素，作为寡核苷酸修饰后产物，属于临床常用药，可单用，也可作为添加于其他药物，作为一种药物成分[3-4]。本次研究选择DionexUltimate3000型色谱仪，分别选择AcclaimSEC-300及MAbPacSEC-1色谱柱，经由体积排阻色谱法进行检测，分析检测结果，获得一定研究成果，现报告如下。

资料与方法

设备与试剂

本次研究选择DionexUltimate3000（ThermoScientific制造）型色谱仪，分别选择AcclaimSEC-300（5μm，分析范围4.6×300mm，由ThermoScientific制造）及MAbPacSEC-1色谱柱（5μm，分析范围2.1×300mm，由ThermoScientific制造），浓度测量仪器为Nanodrop2000（ThermoScientific制造），离心机为ThermoLegendMicro17离心机，20μL环形NanoViper/彩色PEEK管（内部直径为0.18mm），震荡搅拌机，Mettlertoledo320pH计；主要化学试剂如下：HPLC梯度级水（FisherScientific制造，英国），HPLC级乙腈（FisherScientific制造，英国），P4417SIGMA磷酸盐缓冲盐水（片剂，一片溶于200mlHPLC水中，得到0.01M磷酸盐缓冲液）；盐酸小檗碱（产品编号GZDD-0060，CAS号633-65-8，质地纯度≥98.837%，来自贵州迪大科技有限责任公司，常规包装30mg）。

方法

本次研究选择AcclaimSEC-300及MAbPacSEC-1色谱柱，其直径分别为4.6×300mm、2.1×30mm，流速分别为≤0.35mL/min、0.05～0.075mL/min，柱温分别为

结果

盐酸小檗碱在40.371～215.109pmol/μL浓度范围内与峰高之间存在线性关系，R2=0.9302，方程y=5.069x-14.172，详见表1-表5。

结论

20世纪初，国外学者初次提出dsRNA能够对mRNA产生具有特异性作用的讲解作用，能够特异性抑制相应基因在生物体内的表达，也就是在转录后出现基因沉默现象，即RNA干扰，广泛存在于生物体内，属于机体排除外源性核酸物质及内源性异常表达物质所表现出的生物自我保护机制，这为临床研究基因药物提供具有临床效果良好的研发思路。随着对RNA干扰技术的不断深入研究，以及应用RNA干扰技术研发药物应用率逐渐提升，该技术有望成为研究基因药物的重要工具，从而为肿瘤及遗传性疾病的治疗提供强烈助力。小干扰RNA，即siRNA，通常需要与碱基配对后，方可对同源的mRNA进行有效识别，并参与其介导过程。据文献报道，siRNA在生物体内具有一种结构相似的双联RNA，而且siRNA形成过程中，核酸酶Dicer以二聚体形式参与该过程，由于不同生物体内的核酸酶Dicer存在一定的差异，因此形成的siRNA结构也存在一定的差异，由此引发的干扰复合体，即RISC，其把序列作用是反义siRNA，在ATP存在条件下，双链siRNA被解开，即正义链与反义链互换，而且在RISC活化状态下靶mRNA序列被切断。然后新siRNA与同源的新mRNA进行有效识别配对。siRNA相关药物样品可在单修饰及完全修饰情况下，在不同条件下进行影响的检测及研究，有助于从不同方面进一步研究该药物的功效及药理作用。本次研究所用的药物属于植物体内合成后提取，化学性质比较稳定，为检测提供良好的物质基础。

参考文献

[1]沈家欣，刘静，陈鸿雁，等.RNA干扰高通量筛选技术在乳腺癌研究领域的应用[J].中华实验外科杂志，2017，34（4）：713-716.

[2]李紅玲，莫炫永.HPLC法同时测定川黄柏中盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱的含量[J].中国药房，2014，25（27）：2562-2564.

[3]汪超甲.RNA干扰技术原理及其在脑胶质瘤治疗中应用[J].国际神经病学神经外科学杂志，2014，41（6）：562-564.