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费约果果实发育过程中抗氧化物质含量与相关酶的关系

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论文摘要：以费约果‘Coolidge’果实为材料，研究了果实发育过程中总黄酮（TF）、总酚（TP）、抗坏血酸（氧化型DHAsA和还原型AsA）、谷胱甘肽（氧化型GSSG和还原型GSH）含量与相关酶活性的变化及其相互关系。结果表明：在整个果实发育过程中，TF、TP和谷胱甘肽的积累相互促进，存在极显著正相关，其含量在10月30日达到最大，分别为9.74mgREgFW，10.41mgGAEgFW和0.20mggFW（总谷胱甘肽）,同时三者的含量与多酚氧化酶（PPO）活性也存在极显著的正相关，其相关系数分别为r=0.934（p），r=0.900（p）和r=0.901（p）;另外，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、愈创木酚过氧化物（G-POD）和抗坏血酸过氧化物酶（AsA-POD）活性在果实发育过程中下降趋势，其活性与四种抗氧化成分含量存在一定的负相关。

论文关键词：费约果,果实,抗氧化物质,酶活性,相关性

费约果(FeijoasellowianaBerg.)又名肥吉果、菲油果、南美稔、凤榴，系桃金娘科、属常绿灌木或小乔木。起源于巴西，因其具有较高的研究利用价值，多年来各国都非常重视费约果的引进及选育工作。目前，新西兰、法国、日本等国均有专门果园种植，澳大利亚也开始引进和重视。在我国，西南科技大学生命科学与工程学院于2004年从新西兰将其引入四川绵阳地区，经过多年的驯化引种研究，已逐步进入推广种植阶段。费约果的枝叶，会释放出宜人的芳香气味，可作为花坛、花篱等观赏植物种植；另外，费约果果实含有丰富的微量元素和抗氧化成分，具有很高的开发利用价值。随着费约果的成功引入、推广工作的开展，对其各方面研究利用也已逐渐受到人们的关注。本研究以费约果品种‘Coolidge’果实为材料，分析了果实生长发育过程中总黄酮、总酚、抗坏血酸、谷胱甘肽等抗氧化物质含量及其相关代谢酶活性的变化及其相互关系，为进一步推广费约果的种植以及开发费约果天然抗氧化活性成分提高其经济价值提供一定的科学依据。

1材料与方法

1.1材料

费约果果实采自西南科技大学西山校区费约果栽培园‘Coolidge’品种，该品种于2004年从新西兰引进，栽培表现良好。2009年6月30日，7月30日，8月30日，9月30日，10月30日和11月30日分别对果实进行采摘，采摘时选择树体东、南、西、北4个方向高度基本一致，果形端正、无病虫害、大小均匀的果实，每次取10～15枚果实的赤道部位果肉均匀混合，用液氮速冻后带回实验室，保存于-80℃超低温冰箱中备用。

1.2测定方法

利用超声波辅助法提取样品中的总黄酮和总酚。精确称取样品5.0g，用80％的分析纯甲醇超声波提取60min，在4℃条件下4000g离心10min，收取上清液，剩余残渣按照相同方式和条件提取两次，合并上清液并转移至50ml蒸发瓶中，在40℃条件下旋转蒸发提取液中甲醇。用5mL重蒸去离子水溶解残留物，在4℃条件下10000g离心20min，收集上清液储存在-20℃冰箱中用于总黄酮、总酚含量测定。根据Kim等方法测定类黄酮含量，用芦丁作标准曲线，其含量采用单位鲜重等量芦丁（rutinequivalents，RE）表示（mgREgFW）；采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量，用没食子酸（Gallicacid，GA）作标准曲线，其含量采用单位鲜重等量没食子酸（gallicacidequivalents，GAE)表示(mgGAEgFW)。

抗坏血酸和谷胱甘肽的提取采用三氯乙酸法：取0.50g鲜样加入5mL预冷的5％三氯乙酸，冰浴研磨成浆，15000g离心15min，上清液为反应液。抗坏血酸和谷胱甘肽含量测定参考陈建勋的方法。

采用01illodeng抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)活性的测定参考Amako等的方法,以1min内OD变化0.01定义为1个酶活性单位;单脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性的测定参考Shigeoka等的方法,以1min内OD变化0.01定义为1个酶活性单位;谷胱甘肽还原酶(GR)活性的测定参考Smith等的方法,以1min内每克鲜样OD变化0.01定义为1个酶活性单位；超氧化物岐化酶（SOD）采用氮蓝四唑法；过氧化氢酶(CAT)采用分光光度法；过氧化物酶（POD）采用愈创木酚法；多酚氧化酶(PPO)采用儿茶酚法。

以上酶活测定温度均保持在24℃以下进行。

1.3数据分析

以上试验均重复3次，实验数据采用SAS软件（8.1版本）ANOVA过程做差异显著性检验，并用LSD法作多重比较分析，用CORR过程分析变量间的相关系数。

2结果与分析

2.1费约果果实发育过程中总黄酮、总酚、抗坏血酸