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解析中和法在微生物限度检查中的应用

摘要：在做药物的微生物限度方法学验证时,一般首先采用常规法、稀释法

验证,当药物有一定抑菌性的时候,经常采用薄膜过滤法。中和法的使用,在中国药

典中由于没有给出具体的方法,而且受到中和剂的选择、中和剂的使用量等因素

的影响,不如薄膜过滤法更容易被采用。但在实际工作中,薄膜过滤法不仅操作繁

琐而且易染菌,中和法因其自身的优势，也常常被使用，本文作者以3种药物为

例,详细说明如何采用中和法进行微生物限度方法学验证，希望能够对大家有所

帮助。

关键词：中和法；微生物限度检查；应用

前言：

中和法即在所用的稀释剂和培养基中加入一定量的中和剂和灭活剂,使其抑

菌力得到消除的方法,在《中国药典》2010年版中,凡含汞、砷或防腐剂等具有抑

菌作用的供试品可以选用此方法。胡文红等［1］采用0.1mol/LMnSO4溶液作为

中和剂来进行氟喹诺酮类药物的无菌及微生物限度检查。张光华等［2］用3%

聚山梨酯80%和0.3%蛋黄卵磷脂作为中和剂来进行化学药的微生物限度检查,可

明显降低药品的抑菌性。孙伟等［3］用β-环糊精作为中和剂来消除喹诺酮类抗

生素药品抑菌活性,解决该类药品微生物限度检查方法建立困难问题。在中华人

民共和国国家标准GB/T24404-2009(即ISO21149:2006)化妆品中需氧嗜温性细菌

的检测和记数法［4］中,详细列出了针对防腐剂抑菌活性的中和剂和漂洗剂,较《中

国药典》2010年版二部［5］中关于中和剂的选择列表更为详细和全面。

1、材料

1.1样品

①葡萄糖酸氯己定软膏：规格：0.2%；②盐酸多塞平乳膏：规格：10g：0.5g；

③盐酸二甲双胍控释片：规格：0.5g。

1.2试验菌株基及试剂

本文所使用菌株均来源于中国药品生物制品检定所,基均来源于中国药

品生物制品检定所,试剂均来源于国药集团化学集团试剂有限公司。

2、方法参考《中国药典》2010年版二部附录ⅪＪ。

3、结果

3.1葡萄糖酸氯己定软膏

葡萄糖酸氯己定是一种广谱的抑菌剂和杀菌剂,对革兰氏阴性菌,革兰氏阳性

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菌及真菌均具有较强的抑制和杀菌作用。在微生物限度检查时,常规法和培养基

稀释都无法完全消除其抑菌作用,需选用一定的中和剂消除葡萄糖酸氯己定的抑

菌作用才能进行检验。研究人员制备的D/E中和培养基可有效的中和多种有抑

菌成分物质的抑菌作用。研究人员采用一定的中和剂对葡萄糖酸锌氯己定乳膏的

抑菌作用进行中和,可以满足微生物限度检查回收率的要求。由于本品为软膏剂,

因此我们选择了聚山梨酯80和油酸山梨坦作为乳化剂和中和剂来对葡萄糖酸氯

己定进行中和,通过对微生物限度检查法的验证,建立其微生物限度检查法。

3.1.1供试品制备

取供试品10g置无菌锥形瓶中,加10g聚山梨酯80和5g油酸山梨坦,缓慢搅

拌,并加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,制成1:10供试液。

3.1.2回收率结果

见表1。由表1可见,稀释剂对照组回收率均大于70%,3批样品的试验组回收

率均大于70%,符合《中国药典》2010年版二部附录ⅪＪ的要求,因此可以按此方

法进行微生物限度检查。

3.1.3控制菌检查