《血红蛋白的提取和分离》名师课件.pptVIP

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血红蛋白的提取和分离辉县市第二高级中学李艳琴本课题学习目标体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并说出色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。1、主要概念：①凝胶色谱法②电泳法③缓冲溶液④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。2.主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理②电泳法分离样品的原理③缓冲溶液的组成和作用3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法4、课题难点：①样品的预处理②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。一、基础知识：（一）蛋白质提取和分离原理（二）蛋白质提取和分离的方法1）凝胶色谱法：又称分配色谱法2）电泳法（三）缓冲液的作用二、实验操作－－实验步骤样品处理和粗分离纯化纯度鉴定血液组成成分1.洗涤红细胞2.释放血红蛋白3.分离血红蛋白4.透析血红蛋白二、实验操作－－实验步骤1.洗涤红细胞2.释放血红蛋白3.分离血红蛋白4.透析血红蛋白样品处理和粗分离纯化纯度鉴定血液组成成分蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物理化学性质差异：1.分子的形状、大小2.电荷性质和多少3.溶解度4.吸附性质5.对其他分子亲和力1.凝胶色谱法（1）原理：（2）材料：凝胶大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。凝胶是微小的多孔性球体，如葡聚糖或琼脂糖。内部有许多贯穿的通道.根据相对分子质量的大小,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。概念：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子2．凝胶电泳法：1）原理：不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。2）影响蛋白质分子运动速度的因素电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程思考：蛋白质为什么带有电荷？在一定的pH下，蛋白质可解离的基团会带上电荷2．凝胶电泳法：1）原理：不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。2）影响蛋白质分子运动速度的因素电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程思考：蛋白质为什么带有电荷？3）常用电泳方法琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。优教提示：可打开素材实验演示：琼脂糖凝胶电泳影响蛋白质分子运动速度的因素?决定运动方向电场作用力形成阻力决定运动速率电荷性质电荷量分子形状分子大小√√√√√√√由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等（4）缓冲溶液－－洗脱剂作用：配制：调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。思考：如何配制不同pH值不同的缓冲液？血液组成成分阅读思考：血液由______和________两部分组成。血细胞中________细胞数量最多，细胞中含量最高的化合物是_____________。该化合物是由_____________和____________构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的______________________基团。血浆血细胞红细胞血红蛋白2条α-肽链2条β-肽链亚铁血红素1.洗涤红细胞阅读思考：洗涤的目的是什么？洗涤的方法是什么？洗涤干净的标志是什么？血液100mL3g柠檬酸钠低速离心2min红细胞血浆吸出血浆红细胞5倍体积生理盐水搅拌10min重复洗涤3次，直至上清液没有黄色采样分离－吸浆倒红－加液搅拌－重洗三次低速短时间离心生理盐水优教提示：可打开素材实验演示：血红蛋白的提取和分离2.释放血红蛋白阅读思考：释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了