体型控制器：S6K1，相关磷酸化抗体介绍.pdf

体型控制器：S6K1，相关磷酸化抗体介

绍

前言

S6K1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，因能介导核糖体蛋白S6磷

酸化而得名。众所周知，胞内蛋白磷酸化在多种生理及病理过程

中发挥重要作用，并与癌症的发生发展关系密切。除此之外，S6K1

还有控制体型的功能，下文我们将详细描述。

01S6K1概述

S6K1（RibosomalproteinS6kinasebeta-1）主要由三个结构

域组成，分别是N端结构域（NTD）、中间激酶结构域（KD）和C

端自抑制结构域（CTD）（如图1）。S6K1具有两种形式：p70和

p85，两者的区别是p70相较于p85缺失N端的23个氨基酸的核

定位序列(NLS），其余序列完全一致，所以S6K1的WB结果往往

呈现双条带的显影。

S6K1结构示意图（源自参考文献：/10.1016/j.lfs.2015.03.001）

S6K1介导核糖体蛋白S6的磷酸化，发挥调节转录、细胞周期及

维持细胞生成等作用，在癌症的发生发展中具有重要作用。S6K1

是雷帕霉素靶蛋白（mTOR）下游的一个重要效应器，同时也是一

个前沿的药物靶点。根据药融云数据显示，全球在研的S6K1靶点

药物共有26个，大部分处于药物发现阶段，其中走在最前列的是

默克公司的DIACC-3010（临床Ⅲ期），靶向多种肿瘤。

02S6K1调控体型研究

S6K1的激活是一个多步骤调控的过程。静息状态下，S6K1的C

端自抑制结构域与N端结合，不展现激酶活性。但是当C端多位

点磷酸化之后，S6K1转变为开放构象，暴露出389位的苏氨酸位

点（p70S6K1的T389对应p85S6K1的T412），并被mTORC1复

合物磷酸化，进而展示激酶活性。S6K1磷酸化S6的位点有Ser235、

Ser236、Ser240、Ser244、Ser247等。

在细胞模型中，如果将S6五个磷酸化位点（Ser235、Ser236、

Ser240、Ser244、Ser247）进行丙氨酸（Ala）替换，导致S6K1

无法磷酸化S6，则MEF、胰岛β细胞会增强蛋白合成、加快细胞

分裂速度，造成细胞体型明显变小。细胞生长和增殖的速率与蛋

白质合成的速率成正比。在正常细胞过程中，当生长因子和营养

物质存在时，S6K1会刺激蛋白质合成。

在小鼠模型中，同样在高脂肪饮食喂养的情况下，S6K1基因缺陷

小鼠体重相比野生型少30%以上，且主要是脂肪积累减少。结果

表明氧化磷酸化途径的上调和胰岛素敏感性的提高，S6K1基因缺

陷小鼠可避免高脂肪饮食引起的肥胖，且负向调节胰岛素信号。

因此，S6K1和S6不仅能够调控细胞的体型大小，还能够调控机

体的体型大小。

高脂肪饮食喂养4个月的小鼠体重变化（源自参考文献：

/10.1038/nature02866）

磷酸化抗体验证数据

RecombinantPhospho-p70S6Kinase1(Thr389)Antibody,

RabbitMonoclonal，Cat:110396-R0001

特异性验证：磷酸酶处理

Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(line

A);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min;+)(lineB);

treatedwithIGF-1andλ-phosphatase(lineC)usingPhospho-S6K1(Thr389)

rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110396-R0001)at1:5000dilution(upper),or

Anti-RPS6KB1rabbitpolyclonalantibody(Cat:10099-T38)(lower)at1:5000

dilution.

特异性验证：磷酸化多肽竞争

Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(line

A);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min),withoutpeptide

(lineB)orantigen-specificphosphopeptide(lin