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B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基因反式激活能力的比较--第1页
B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基
因反式激活能力的比较
【摘要】目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对多药
耐药基因1(MDR1)反式激活能力的差别。方法PCR扩增B、C基因型HBV
X基因并克隆于pcDNA3.1/HisC载体(重组载体分别为pcDNA3.1/HisC
XB及pcDNA3.1/HisCXC)。以FuGENE6将重组表达载体转染HepG2
细胞,采用融合表达的Xpress多肽表位抗体,通过Westernblot
检测目的蛋白在不同时间段的表达。PCR扩增MDR1基因启动子并克隆
于萤火虫荧光素酶报告载体pGL3Basic(重组载体为pGLMDR)。
pGLMDR分别与pcDNA3.1/HisCXB或pcDNA3.1/HisCXC共转
染HepG2细胞,转染后48h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性。
实验数据以SPSS11.5软件分析。结果成功克隆X蛋白表达载体及MDR1
报告载体。Westernblot显示pcDNA3.1/HisCXB或pcDNA3.1/HisC
XC在HepG2细胞中均能表达HBVX蛋白,以转染后48h为最高。当
pGLMDR报告质粒与X基因重组载体或空载体质量比在1∶2~1∶4
范围内,萤火虫荧光素酶在各转染细胞内的活性依次为
pcDNA3.1/HisCXB+pGLMDR组gt;pcDNA3.1/HisCXC+pGL
MDR组gt;pcDNA3.1/HisC+pGLMDR组(对照组),且存在剂量
关系。结论B、C基因型HBVX蛋白对多药耐药基因均有反式激活能力,
且B基因型强于C基因型。
【关键词】肝炎病毒乙型癌肝细胞基因病毒反式激活(遗
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B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基因反式激活能力的比较--第1页
B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基因反式激活能力的比较--第2页
传学)病毒蛋白质类基因MDR药物耐受性
X蛋白是乙型肝炎病毒(HBV)最重要的致病因子之一,可反式激
活多药耐药基因1(multidrugresisitancegene1,MDR1)[1],与HBV
相关性原发性肝细胞癌(primaryhepatocellularcarcinoma,HCC)的
高度恶性化及对化疗药物高度不敏感有关。研究表明B、C基因型HBV
相关性HCC患者的临床表现及病理改变具有明显差别,而B、C基因型
HBVX蛋白功能存在差异[24]。本研究拟通过分析B、C基因型HBV
X蛋白对MDR1基因反式激活能力的差异,进一步探讨HBV基因型与致
病性的相互关系。
1材料和方法
1.1材料
1.1.1HBVDNA及肝细胞株pUC18XB(含B基因型HBVX基因的
pUC18重组载体)及pUC18XC(含C基因型HBVX基因的pUC18重组
载体)为本室保存。HepG2肝癌细胞株(美国组织细胞库,ATCC)。
1.1.2主要试剂DMEM培养基、DNAzol、胎牛血清、We
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