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多种细胞的培养方法

HePG2细胞和L-02细胞的传代：

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用

的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。

细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hanks液配制成0.25%

的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml

的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入

胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3分钟左右即

用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显

微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，

则要终止消化了。

16HBE细胞株的传代方法：

镜下观察细胞生长融合达70-80%，准备传代。常规开紫外照射超净台20分钟，

同时把含10%胎牛血清的MEM培养基、0。25%胰酶、PBS放置37度培养箱中孵育。

20分钟后开始传代。先弃掉旧培养液，加PBS洗一次，然后加0。25%胰酶2ml

消化（指25乘25cm大小的培养瓶）细胞，镜下观察细胞，细胞突起回缩，细胞

变圆，然后将培养瓶放置37度二氧化碳培养箱中孵育3分钟左右（当然时间是

随机的，比如：新配的胰酶作用时间短一些，配制时间长的胰酶作用时间会长一

些，当然要不断地镜下观察），待细胞大部分消化下来（大部分细胞呈流沙状脱

离瓶壁），加4ml含10%胎牛血清的MEM培养基终止消化。反复吹打瓶壁上残留

的细胞，并将已消化下来的细胞吹打均匀，然后吸入离心管中1000转离心1分

钟，然后弃掉上清，用手指将离心管中的细胞弹打均匀，加新培养基，吹打均匀，

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分至3个新的培养瓶中，补足培养液。将培养瓶平放，小心移入37度二氧化碳

培养箱中培养过夜。次日观察。

胃癌细胞AGS和SGC-7901的培养：

细胞传代时不能长的太满,70%-80%就可以传了.实验前先把紫外灯打开照30分

钟,然后再把鼓风机开10分钟,同时把培养液和胰酶放入37度水浴箱中,千万记

住不要盖上水浴箱的盖子.传代时,我一般把培养瓶口过一下火,就直接把培养液

到去,再用0.25%的胰酶(不含EDTA)消化.等细胞变圆,细胞间空隙加大就直接把

培养液到去,不用离心,然后再吹打,虽说要轻柔,但很难吹打成单细胞悬液,所以

稍用力也没有关系.虽然操作不规范,但节省时间,细胞也没有被污染.

AAV-293细胞的传代:

AAV-293细胞较喜欢成团生长,比较娇嫩,怕冷,传代时不要一次从二氧化碳培养

箱拿出很多瓶,一次只要拿2-3瓶出来传就可以了,否则细胞很容易死掉.细胞在

50-60%传代,细胞生长状态最好.

用D-Hanks液配制成0.25%的胰酶消化半分钟左右,弃去胰酶.观察培养瓶是否

有针孔样缝隙,如有就可以加入培养液吹打细胞.消化过久,对细胞损害很大,而

且成团很难吹打成单个细胞.然后加入含有10%小牛血清的DMEM.轻轻放入二氧

化碳培养箱中培养.

肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如：

（１）Ａ５４９（肺腺癌）

（２）ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌）

（３）８０１（非小肺细胞癌）

（４）ＮＣＩＨ４６０（大细胞肺癌）

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在消化传代过程中，步骤基本一致：

吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化