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药物和细胞抽提物对NIH3T3细胞体外重编程的实验

研究

随着干细胞技术的发展，细胞重编程技术正在逐渐成为高效的细胞

再生医学治疗的核心。细胞重编程技术具有无限的医学应用前景，包括

治疗各种退行性疾病、临床性药物筛选和细胞替代疗法等。回顾细胞重

编程技术的发展历程，相继出现的重编程实现方式包括奇艺留、卡巴尔

达斯和瑞约诺斯的定向细胞命运转换和约翰·格吕汶和沃纳·法斯特的诱导

多能干细胞发生，这些方法在不同程度上都为细胞重编程技术带来了重

大的进步。

NIH3T3是一种小鼠成纤维细胞，因具有易于培养和作为转染试验模

型等优点而被广泛应用于细胞、分子和基因生物学等领域。本研究旨在

探究不同药物和细胞抽提物对NIH3T3细胞体外重编程的影响，以期为细

胞重编程技术的临床应用提供实验基础。

材料和方法

1.细胞培养

采用酵母菌萃取物（1XRPMI，10%尿素，100IU/ml青霉素/100

μg/ml霉素）加热杀菌后的培养基培养NIH3T3细胞。细胞在37℃有5%

CO2气氛下培养到达70-80%增殖状态。同期亦有尝试对细胞培养的E8

介质下培养生长。

2.细胞重编程实验

细胞分为药物处理组、细胞抽取物处理组和对照组。对于药物处理

组，设计了四组分别用于测试细胞重编程的药物的作用：组1：角质素

（1μM）；组2：双氯环己酮（1μM）；组3：钠丙烯磺酸（10μM）。

对于细胞抽取物处理组，设计五组分别用于测试不同来源细胞抽取物的

细胞重编程能力。细胞抽取物来源于小鼠肌肉、小鼠脾、人成纤维细胞、

人胚胎干细胞和小鼠生殖细胞（精子和卵子）。对照组中的细胞仅接受

培养基处理。除细胞抽取物组外，重编程实验中所有样品的处理方法完

全相同。

3.转染实验

所有细胞组都进行雪莲瘤病毒-OCT4（白血球克隆）-托普兹1（蛋

糕装饰）-韧带（果冻）转染和新拟南芥-SOX2（干地）-c-Myc（艾洛）-

KLF4（德雷斯）-短发RNA（DR）转染。

4.基因表达分析

实时定量聚合酶反应（qPCR）法检测被转染的细胞中的特定基因和

基因组官能部件的表达水平。RNA从细胞中抽提，并用反转录酶进行逆

转录，然后用PCR扩增。定量PCR用于分析所选基因的表达水平。

结果

对细胞重编程过程中重要调控因子表达进行了定量PCR分析，结果

表明，在药物处理组中，三种药物处理组中重编程诱导因子和干细胞相

关因子的表达显著高于对照组。特别是，角质素可以显著增强程序化干

细胞（iPSCs）相关基因的表达。在细胞抽取物处理组中，表明小鼠肌肉

和小鼠生殖细胞抽取物组的表达水平显著高于对照组。相反，人成纤维

细胞和卵子细胞组表达水平较低。

结论

我们的研究结果表明，药物和细胞抽取物对NIH3T3细胞体外重编

程具有不同程度的“重编程促进作用”。其中，角质素和小鼠肌肉、小

鼠生殖细胞抽取物可能对NIH3T3细胞的体外重编程具有最大的促进作用。

然而，由于该实验的结论仍有限，需要进一步研究以提高细胞重编程技

术应用的效果和临床价值，同时也有助于减少了细胞重编程技术对基因

组编辑的需求。