标准病理组织制片和染色技术.pptVIP

（2）Mayer氏苏木素（Mayer,1903）苏木素0.1g蒸镏水100ml钾明矾5g柠檬酸0.1g水合醛5g碘酸钠20mg将蒸包馏水稍为加温,加入苏木素不停地搅拌直至溶解,再加入钾明矾,令其溶解后再加入碘酸钠过滤后即可使用,染色时间10－20分钟,如果先用天表蓝为媒染剂,染色时可在2－3分钟。配制苏木素的注意事项1、苏木素可以配成5%或10%，让其氧化产生苏木红，然后根椐每次配制溶液的量，再决定加入多少。2.在配制苏木素时，三角烧瓶的选择也很重要，例如，配制500ml的溶液，应选用1500－2000ml的三角烧瓶，配制1000ml则可选3000ml的烧瓶，这样溶液在加入氧化汞时，才不会喷出瓶外。3.冰醋酸一定要在溶液过滤后加入如果过滤前加入，则在过滤时溶液很难通过滤纸，这主要是冰醋酸草可造成对滤纸的损害。(二）伊红的配制1.1%伊红洒精的配制伊红（水溶）5g70%-75%酒精500ml取少许蒸馏水来溶解伊红或称曙红，当完全溶解后，再加入酒精，然后再加入少许冰醋酸，此时溶液即可变为鲜红色。注意：冰醋酸一定要加进去如果没有加入冰醋酸，细胞浆将难以染得鲜艳。2.切片染完苏木素后的分化，应该如何控制和注意什么问题？（1）分化液中盐酸不能高于1%，否则会因分化过强而将已着色的颜色大部分脱水，造成染色过浅。（2）对各种组织应视情况而定，如淋巴结的切片，应分化较长时间等。（3）分化完后，应在显微镜下观察，如发现核中的物质不清楚，则应继续分化至清晰为止。（4）要认真操作，细心观察，不断总结。胃类癌（瘤细胞小而一致）瘤细胞的多形性病理性核分裂像平滑肌、平滑肌瘤和平滑肌肉瘤大肠腺体、腺瘤和腺癌正常鳞状上皮、乳头状瘤和鳞状细胞癌淋巴管转移癌肺淋巴管转移癌冰冻切片一、种类：1、低温恒冷箱切片法2、二氧化碳冰冻切片法3、甲醇循环制冷冰冻切片法4、半导体冰冻切片法5.氯乙烷冰冻切片法二、冰冻切片的目的1、在手术进行中。突然发现病人的病变与原诊断不相符合或者怀疑时需要病理给予确定。2.了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞或者转移的程度，以利于确定以后的治疗措施。3、对于已确定恶性肿瘤的病人则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤细胞。4、在剖腹探查所发现的肿块。5、显示组织中的脂肪类物质。6.某些酶的显示如ATP酶琥珀酸脱氢酶等。7、神经病理学中的某些染色法。8、对某些物质所进行的免疫荧光的研究。三、冰冻切片的操作（1）本室现有Shandon-AS620E型冷冻切片机的主要性能。左边的切片台可达到-60左右,冷冻箱内在0～-30间可任意调节,箱面上有电子控制板,装有急速冷冻,即放上标本启动该键机器马上进行冷冻工作并持续10分钟；有冷冻台温度显示冷冻箱内温度显示；有即时除霜内温度显示；有即时除霜键,启动该键机器可持续工作15分钟,将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉；有照明键,启动该键可照明工作间；有消毒键当进行一星期的工作后,启动该键可对工作间进行消毒；有工作间面的密锁键启动键可将工作间锁住,除此之外该机的左边有四个按键两个为快速自动进退、两个为微小进退、另有一个手动旋钮,调节修块时的进退。（2）切片取末经固定的组织不能太大太厚,厚者冰冻费时,大者难以切完整。最好24×24×4mm。（3）取出组织支承器,放平摆好组织周边滴上包埋剂,速放入冷冻台上冰冻,小组织应先取一组织支承器滴上包埋剂让其冻成一个小台再放上细小组织,滴上包埋剂。（4）将冷冻好的组织块夹紧于切片机上修平切面。（5）调好厚度,根椐不同的组织而定,一般在5-10um.（6）调好防卷板,制作冰冻切片的调节,关建在于防卷板的调节,这就要求要细心,准确,将其调校,调校至适当的位置,此时切片。冰冻切片在第一时间顺利地在刀与防卷板之间通过,平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板,取一载片,将其附贴上即可。（7）用于附贴切片的载片,不能存放入冷冻的地方,于室温存放即可。因为当附贴切片时,从室温中取出的温差,当温度较高的载片附贴上温度低的切片时,由于两种物质温度的差别,当它们碰撞在一起时,分子间的彼此转移而产生了一种吸附力。使切片与载片牢固地附贴在一起。如果用冷藏的载片附贴切片,就没有这种现象发生。（8）应视不同的组织选择不同